沙门氏菌（Salmonella）是肠杆菌科沙门氏菌属的革兰氏阴性兼性厌氧杆菌，为全球分布最广泛、危害最严重的人畜共患食源性致病菌之一，也是公共卫生、食品安全与动物疫病防控领域的重点研究对象。该菌宿主谱广，可长期定植于人类、畜禽、宠物及野生动物肠道，通过污染肉、蛋、奶、水产与蔬菜等食材经消化道传播，具备隐蔽性强、易引发聚集性感染的流行特征。

本研究由江南大学团队开发了一种‌便携式、基于重组酶聚合酶扩增（RPA）技术的双模式（比色/荧光）侧流层析试纸条传感器‌，用于在生菜和牛奶样本中实现‌沙门氏菌的现场即时检测‌。

1.‌靶标基因‌：选择沙门氏菌高度特异且保守的‌fimY基因‌作为检测靶标。

2.‌核酸扩增‌：设计并优化了针对fimY基因的RPA引物，并在5‘端分别标记‌生物素‌和‌FAM荧光基团‌。RPA反应可在室温（25°C）下快速（15分钟）富集目标基因片段。

其中，使用了沃博生物warbio的产品，DNA恒温快速扩增试剂盒（DNA试纸条型），货号B8203C5.

3.‌检测机制‌：扩增产物（两端分别带有生物素和FAM的双链DNA）与试纸条上的‌AuNPs@FAM抗体探针‌结合。在层析过程中：

o‌阳性样本‌：生物素端被试纸条‌检测线（T线）‌ 上固定的链霉亲和素捕获，形成“链霉亲和素-扩增产物-AuNPs@FAM抗体”三明治复合物，在T线产生信号。

o‌阴性样本‌：无此复合物形成，T线无信号。

o‌质控线（C线）‌：无论样本阴阳性，AuNPs@FAM抗体探针均会被C线上的二抗捕获，确保检测过程有效。

1.‌比色模式‌：通过肉眼观察T线是否出现‌酒红色的金纳米颗粒聚集带‌进行定性判断。使用智能手机拍照，并通过ImageJ软件分析T线与C线的灰度强度比值进行半定量分析。

2.‌荧光模式‌：在紫外灯（365 nm）照射下，T线上的FAM基团发出‌绿色荧光‌。使用智能手机捕获荧光图像，并通过ImageJ分析平均荧光强度进行定量分析。

3.‌优势‌：双模式设计实现了‌视觉初筛‌与‌仪器精确定量‌的结合，并通过信号交叉验证，有效降低了假阴/假阳性风险。

1.‌灵敏度与线性范围‌：

o‌比色模式‌：检测限为‌10 CFU/mL‌，线性范围为‌10² 至 10⁶ CFU/mL‌。

o‌荧光模式‌：检测限为‌1 CFU/mL‌，线性范围为‌10¹ 至 10⁶ CFU/mL‌。

2.‌特异性‌：对沙门氏菌表现出优异特异性，在高达10倍浓度的其他食源性致病菌存在下无交叉反应。

3.‌实际样本检测‌：在人工污染的灭菌生菜和牛奶样本中进行了验证。

o‌回收率‌：比色模式为90.6%-109.4%，荧光模式为91.3%-107.4%。

o‌精密度‌：相对标准偏差（RSD）均低于6.5%，表明方法可靠。

4.‌检测时间‌：从样本处理到结果读出，总时间约‌25分钟‌（核酸提取5分钟，RPA反应15分钟，层析读数5-10分钟）。

1.‌高灵敏度与宽线性范围‌：尤其荧光模式达到1 CFU/mL的极低检测限。

2.‌快速便携‌：整个检测过程无需复杂仪器，RPA在室温进行，适合现场检测。

3.‌操作简便‌：结果可通过肉眼初步判断，定量分析仅需智能手机和免费软件。

4.‌成本效益高‌：避免了昂贵的温控设备和专业操作人员。

本研究成功构建了一种集‌RPA扩增‌与‌双模式侧流层析检测‌于一体的传感器，为食品中沙门氏菌的现场、快速、超灵敏检测提供了有效方案。该方法符合即时检测的发展需求，并具有通过更换特异性引物和靶标序列，推广至其他食源性病原体检测的潜力。

原文链接：10.1016/j.foodchem.2025.144058

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