今天跟大家分享一篇近期发表在《Journal of Biological Engineering》上的前沿研究，它成功地‌用CRISPR-Cas12a/Cas13a双酶技术，实现了基孔肯雅热病毒和登革病毒的快速、精准“双检”，为虫媒病毒诊断带来了新突破。

基孔肯雅病毒 (Chikungunya Virus, CHIKV) 和登革病毒 (Dengue Virus, DENV) 都是通过蚊子传播的急性发热疾病，临床表现高度相似，都表现为‌高热、头痛、皮疹和关节痛‌。但它们在‌治疗方案和预后‌上截然不同：

登革热：‌ 可能进展为重症，出现出血热，治疗核心是补液和密切监测。

基孔肯雅热：‌ 约 ‌30%-40%‌ 患者会发展为持续数月甚至数年的慢性关节炎，致残率高，严重影响生活质量。

传统的核酸检测金标准RT-qPCR虽准但‌慢、贵、需要专业实验室‌，无法在基层或疫情现场应用。

‌技术突破：用CRISPR这把“分子剪刀”，做到精准“双检”‌

这项研究利用CRISPR技术的 ‌“附带切割活性”‌ ，开发了一个‌便携、无需复杂仪器‌的检测系统。他们巧妙地将‌Cas12a（特异性切割DNA）‌ 和‌Cas13a（特异性切割RNA）‌ 酶联合作，结合‌逆转录重组酶辅助等温扩增技术 (RT-RAA)‌，实现了在一个管内快速、同时地检测两种病毒的核酸。

其中，使用了沃博生物warbio的产品，CRISPR双酶切检测试纸条（变色龙），货号JY0308.

技术核心流程：‌

等温扩增‌：通过RT-RAA将病毒RNA在等温（42℃）条件下快速扩增。

双靶向切割‌：设计特定的crRNA去引导：

·‌Cas12a‌ 识别并切割CHIKV的E1基因序列（DNA）。

·‌Cas13a‌ 识别并切割DENV的3'-UTR区域的RNA。

信号放大与读取‌：CRISPR酶被激活后，会无差别切割周围的‌荧光标记探针（侧流层析试纸条）‌，产生肉眼可见的红线信号，或可由荧光设备定量。

‌效果如何？四大核心亮点‌

‌超高灵敏度‌：最低检测限可达 ‌10¹–10² copies/mL‌，与标准RT-qPCR的检测能力相当。

‌100%准确率‌：在构建的模拟样本（单阳、共阳、阴性）中，检测结果与RT-qPCR结果的一致性达‌100%‌。

精准鉴别诊断‌：不仅能区分单一感染（CHIKV或DENV），也能同时识别‌双感染 (Co-infection)‌。在10份模拟阴性样本（背景中包含其他蚊媒病毒）中，均无交叉反应。

可视化、快速、便携‌：基于侧流层析纸条（试纸条）可以实现‌20分钟内肉眼判读‌，不需要仪器，特别适合资源有限地区。

‌技术优势与前景‌

这项研究相较于传统qPCR和既往的其他CRISPR检测有显著优势：

·‌单管双检‌：相比于需分型检测的qPCR或只能单检的旧方法，一次操作就能同时出两个结果。

·‌无设备依赖‌：告别昂贵的热循环仪，可满足床旁检测和现场筛查。

·‌高效稳定‌：通过精心优化的探针、酶浓度和反应条件，保证了高特异性与高效率。

·‌未来潜力大‌：团队计划进一步扩展crRNA库，以覆盖更多虫媒病毒（如寨卡、黄热病等），有望形成‌“虫媒热筛查试剂盒”‌，真正实现“一体多检”。

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