RPA（重组酶聚合酶扩增）技术原理

英国TwistDx公司(前身为ASM科技有限公司)成立于1999年，基于英国剑桥Babraham研究院建立的生物技术公司。该公司通过突破等温DNA扩增，开发的重组酶聚合酶扩增专利技术(RPA),被誉为DNA诊断领域的革命性创新。(http://www.twistdx.co.uk) 

What is RPA?

概念：重组酶聚合酶扩增(Recombinase Polymerase Amplification，RPA)，被称为是可以替代PCR的核酸检测技术。RPA技术主要依赖于三种酶：能结合单链核酸(寡核苷酸引物)的重组酶、单链DNA结合蛋白(SSB)和链置换DNA聚合酶。这三种酶的混合物在常温下也有活性，最佳反应温度在37°C左右。

RPA技术原理：

重组酶与引物结合形成的蛋白-DNA复合物，能在双链DNA中寻找同源序列。一旦引物定位了同源序列，就会发生链交换反应形成并启动DNA合成，对模板上的目标区域进行指数式扩增。被替换的DNA链与SSB结合，防止进一步替换。在这个体系中，由两个相对的引物起始一个合成事件。整个过程进行得非常快，一般可在十分钟之内获得可检出水平的扩增产物。

Who uses RPA?

以此为基础的TwistAmp® 核酸扩增产品，能够在15分钟内进行常温下的单分子核酸检测该技术对硬件设备的要求很低，特别适合用于体外诊断、兽医、食品安全、生物安全、农业等领域。

TwistAmp® Basic 试剂盒可实现 DNA 扩增。包含 DNA 扩增所需的所有酶和试剂，用户只需提供引物和模板。使用 TwistAmp® Basic 时，即使 PCR 引物也有效。TwistAmp® Basic 已被用于固相、加尾引物、配基、电化学和微阵列等应用。

非常适用于：终点凝胶电泳 DNA 检测、下游应用（例如亚克隆）

TwistAmp® exo 试剂盒可实现实时荧光 DNA 扩增。若想要以均相形式将 TwistDx RPA 扩增技术与 TwistDx 专利荧光 TwistAmp® exo 探针结合使用，则推荐使用本产品。用户只需提供引物、探针和模板。更多信息请参阅手册。

非常适用于：实时荧光 DNA 检测

TwistAmp® nfo 试剂盒可实现横向流动检测用 DNA 扩增。若想要通过终点夹心法（例如横向流动 [LF] 试纸条）检测有效 DNA 扩增反应的产物，则适合使用本产品。用户只需提供引物、探针和模板。

非常适用于：开发低成本的现场侧向层析检测方法。

包含冻干试剂的 TwistAmp® 试剂盒具有以下优势：

RPA 扩增温度要求低，允许使用低成本、便于携带的检验设备。

干 RPA 试剂足够稳定，可以在室温下运输。

允许多种「适宜现场的」检测输出技术，例如侧向层析技术和荧光技术。

RPA 对一些复杂样本类型表现出高度稳健性（即样本耐受性），更适合于许多不同的现场实地应用。

除了在现场实地使用中的优势，通过 TwistAmp® 试剂盒还便于为许多应用和用途开发出快速、特异且灵敏的 DNA 和 RNA 检测方法。

TwistAmp® Liquid 是为了提供散装液体形态的核心 RPA 组分，最终用户能够以不同的比例混合这些组分，以便用户为各自的应用配制预混液*。

TwistAmp® Liquid 具有以下优势：

最终用户可自由调整预混液制备量，而不再被局限于冻干试剂的固定体积

最终用户可自由调整反应体系中的组分比例，这使 RPA 试验开发工作具有更大的灵活性

TwistAmp® Liquid Basic 是一款最适合用于凝胶分析或者作固相、加尾引物、适配体、电化学和微阵列应用的 DNA 扩增试剂盒。TwistAmp® Liquid exo 是一款用于以实时荧光检测扩增反应的 DNA 扩增试剂盒。