产品信息

本产品采用层析式双抗体夹心法检测Cas12和Cas13酶切割产物。当靶基因经过LAMP，RAA/RPA，PCR扩增后，使用Cas12和Cas13酶同时对扩增产物进行切割，Cas12酶对应的DNA信号探针A（Cas12切割），与Cas13酶对应的RNA信号探针B（Cas13切割）进行如下修饰，即可使用本产品进行切割产物的检测：

1）  探针A一端修饰有生物素（Biotin），另一端修饰有异硫氰酸荧光素（FITC）或6-羧基荧光素（6-FAM），探针B一端修饰有生物素（Biotin），另一端修饰有地高辛（Dig）；

2）  或，探针A一端修饰有生物素（Biotin），另一端修饰有地高辛（Dig），探针B一端修饰有生物素（Biotin），另一端修饰有异硫氰酸荧光素（FITC）或6-羧基荧光素（6-FAM）。

预期用途:

Cas12和Cas13双酶切后的产物检测。

包装规格/货号:

包装规格：50条/桶，铝箔袋防潮包装。

图1. 单靶标HybriDetect侧向层析试纸条（彩虹型）结构示意图

储存条件及有效期:

储存条件：存放于避光干燥处，储存温度4~30℃。

有效期：12个月。

操作步骤:

1. 根据检测样品数量取出相应数量的试纸条，并在吸收垫（图1）上做好标记。每根试纸条只能用于单次，DNA探针和RNA探针同时切割的产物检测。酶切产物体积为50~100µL时，可直接在200µL PCR反应管中检测核酸产物，产物体积不足50µL时，需在PCR管内加超纯水补足体积至50µL，吸打混匀后，才能进行检测。

2. LAMP，RAA/RPA，PCR扩增产物加入CRISPR体系酶切反应结束后，打开PCR反应管，将试纸条结合垫端（箭头端）插入PCR反应管（图1），液面不得超过结合垫最上端，待判读区全部浸润（约需1～2min，外界环境温度较低时，如冬季，会降低吸水速度，判读区浸润时间将会延长），待检测线（T线）显色后，可以将试纸条拿出。根据试纸条显色情况直接读取检测结果。

3.  质控线（C线）显色后10min内观察结果，10min后判读无效。

4.    记录检测结果，将试纸条密封丢弃在安全处。

结果判读:

图2. CRISPR双酶切检测试纸条结果判读示意

颜色说明：本产品为变色双矫正显色试纸条，其中C线为紫色，T1为红色，T2为蓝色。在探针A和探针B等摩尔浓度混合，且终浓度≤500nM时，带有FAM标记的探针酶切后，T1显色为红色，C线逐渐变为蓝色；带有Dig标记的探针酶切后，T2显色为蓝色，C线逐渐变为红色，从而达到互相矫正的目的。

1.   阳性（+）：

试纸条质控线（C线）和2条检测线（T线）均出现条带，其中T1为红色，T2为蓝色，C线为紫色；试纸条质控线（C线）不显色，T1为红色，T2为蓝色时，说明Cas12和Cas13可进行有效酶切，并激活报告基团显色，相应的靶基因均可判定为阳性。

试纸条质控线（C线）和其中1条检测线（T线）出现条带，其中：T1为红色，C线为蓝色时，说明FAM标记信号分子的相应靶基因可判定为阳性；T2为蓝色，C线为红色时，说明Dig标记分子的相应的靶基因可判定为阳性。

2.  阴性（-）：

试纸条质控线（C线）为紫色色条带，检测线（T线）不显色，判定为阴性结果。该结果表明Cas12或Cas13均不能切割报告分子，未能激活报告基团显色。

3.  无效：

试纸条质控线（C线）和2条检测线（T线）均未出现条带，提示所用的试纸条或扩增试剂可能已经损坏、失效或操作有误。此时，应仔细阅读说明书，重新扩增和检测。如果问题仍然存在，应立即停止使用同一批号的产品，并与当地供应商联系。

注意事项及安全提示:

1. 本产品应结合探针使用，如探针合成纯度不足，探针含游离的Biotin或者游离的FITC时，会导致以超纯水为阴性对照的切割产物T线呈现红色，即阴性对照呈现假阳性结果。

2. 本产品可用于探针合成质量的检测。调整空白阴性对照中探针的使用浓度至400 nM，并进行切割反应。当试纸条结合垫端浸入Cas12/Cas13切割产物后的5~7 min内，试纸条T线显红色，即说明探针纯度难以满足实验要求，会因探针纯度不足导致假阳性结果。建议更换探针合成供应商，并重新合成探针。

3. 本产品仅供科研使用。使用前请仔细阅读说明书，严格按照说明书操作。违反或者未按说明书进行操作可能导致错误结果。

4. 产品应依照说明书要求，储存于合适的环境和温度下，并在有效期内使用。储存不当或产品过期可能导致错误结果。打开包装后请尽快使用试纸条，以免因试纸条受潮影响试验结果。检测环境光线不足，操作者色弱等因素均可能导致错误结果。

5. 使用完毕后，应尽快将纸条装进密封袋，妥善处理。本产品为一次性使用产品，仅限科研，请勿重复使用。

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