产品简介

Halo-Tag 技术基于融合蛋白标签和合成荧光配基之间共价键的形成，可用于标记细胞或 其他生化环境中的目的蛋白以表征和分析其定位及功能。Halo-Tag 报告基因蛋白是 33kDa 的 单体蛋白，是一种经基因工程改造、无催化活性的水解酶衍生物，在生理条件下可以快速和 Halo-Tag 荧光配体形成不可逆的共价键从而实现对目的蛋白的高特异性标记。此技术已经广 泛应用于哺乳动物细胞、植物、细菌、酵母和活体模式动物等生物体系。

CA-BriDye666 Ligand 是以硅罗丹明为母体的免洗荧光配体，与 HaloTag 蛋白结合后荧 光信号可开启 70 倍；与 660 nm 白激光完美匹配，也可以适用于 640 nm 或 647 nm 激光器。 水溶性桥环助色团赋予其极高的荧光亮度、光稳定性（彻底抵抗光蓝移）及较好的细胞膜渗透 能力；目前已广泛应用于宽场、共聚焦、单分子示踪和 SIM 超分辨成像等多种模态的成像系统中，其较好的生物相容性使其可以应用于哺乳动物细胞、活体斑马鱼等生物体系，相比 CASiR、CA-JF646 等荧光配体具有显著提升的信噪比。

实验步骤

*所有 CA 系列染料必须依赖 HaloTag 蛋白质标签系统工作，在使用荧光配基染色前请先确认成像生物体系已正常表达 HaloTag 标签蛋白。

1. 在 CA-BriDye 666 干粉产品中加入 5 μL（5 nmol 包装）/2 μL（2 nmol 包装）新鲜干燥的 细胞级别 DMSO 或 DMF 溶剂，充分混合均匀，得到 1 mM 母液（请按照产品规格调整 溶剂加入量）。

2 .将培养基预热至 37 ℃，将 CA-BriDye 666 母液按照 1000 倍稀释比例加入到预热的培养 基中（对于单分子示踪等稀疏标记体系稀释比例可达 107 -109 倍，建议从 1000 倍稀释起 进行染色条件的测试），稀释后的染液应尽快使用，久置后可能导致部分染料分解或沉淀。

3. 吸去已经表达 Halo-Tag 蛋白细胞的培养基，更换为稀释好的染液，在培养箱中孵育 15-30 分钟后可以在不更换培养基的条件下直接进行免洗成像；也可以用预热的培养基或 PBS 缓冲液清洗细胞 1-3 次后用于荧光成像。

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