产品简介

Halo Tag 技术基于融合蛋白标签和合成荧光配基之间共价键的形成，可用于标记细胞或其他生化环境中的目的蛋白以表征和分析其定位及功能。Halo Tag 报告基因蛋白是 33kDa 的单体蛋白，是一种经基因工程改造、无催化活性的水解酶衍生物，在生理条件下可以快速和 Halo Tag荧光配体形成不可逆的共价键从而实现对目的蛋白的高特异性标记。此技术已经广泛应用于哺乳动物细胞、植物、细菌、酵母和活体模式动物等生物体系。

CA-BriDye626 是一款可以高效标记Halo Tag基团的荧光配体，通过常用的cy3成像通道激发，可以获得非常稳定、高强度的荧光信号，CA-BriDye626 荧光配体不仅具有较高的荧光亮度、较高的光稳定性和较低的光毒性，其极佳的生物相容性和高效的细胞膜渗透能力，使得 CA-BriDye626 荧光配体在哺乳动物细胞、植物、细菌、酵母和活体模式动物等生物体系中有着广泛的应用，并可在除宽场、共聚焦、单分子定位示踪和 SIM 之外的 STED 超分辨成像体系中进行活细胞或固定细胞荧光成像。

实验步骤

*所有 CA 系列染料必须依赖 HaloTag 蛋白质标签系统工作，在使用荧光配基染色前请先 确认成像生物体系已正常表达 HaloTag 标签蛋白。

1. 在 CA-BriDye 566/626 干粉产品中加入 5 μL（5 nmol 包装）/2 μL（2 nmol 包装）新鲜干 燥的细胞级别 DMSO 或 DMF 溶剂，充分混合均匀，得到 1 mM 母液（请按照产品规格 调整溶剂加入量）。

2. 将培养基预热至 37 ℃，将 CA-BriDye 566/626 母液按照 1000-10000 倍稀释比例加入到 预热的培养基中（对于单分子示踪等稀疏标记体系稀释比例可达 107 -109 倍），稀释后的 染液应尽快使用，久置后可能导致部分染料分解或沉淀。

3. 吸去已经表达 Halo-Tag 蛋白细胞的培养基，更换为稀释好的染液，在培养箱中孵育 30- 120 分钟后用预热的培养基或 PBS 缓冲液清洗细胞 1-3 次后用于荧光成像。 

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