二氢黄酮醇还原酶（DFR）检测试剂盒（微量法 100T/48S）
| 货号 | SH0066 | 售价（元） | 3600 |
| 规格 | 100T/48S | CAS号 |
- 产品简介
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货号 |
名称 |
规格 |
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SH0066 |
二氢黄酮醇还原酶（DFR）检测试剂盒（微量法 100T/48S） |
100T/48S |
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
二氢黄酮醇还原酶是类黄酮合成途径中的一个关键酶，在决定植物的花色、叶色、果色和其他经济器官的色泽及其营养品质方面起着重要作用。
测定原理：
二氢黄酮醇还原酶作用于二氢槲皮素产生儿茶素，可与香草醛缩合形成红色化合物，在500nm处有特征吸收峰。
组成：
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产品名称 |
SH0066-100T/48S |
Storage |
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提取液：液体 |
100ml |
4℃ |
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试剂一：液体 |
12ml |
4℃ |
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试剂二：液体 |
1.5ml |
4℃ |
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试剂三：粉剂 |
1瓶 |
4℃ |
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试剂四：液体 |
30ml |
4℃避光 |
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说明书 |
一份 |
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试剂三：临用前加2ml蒸馏水溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
自备仪器和用品：
研钵、低温离心机、震荡仪、氮吹仪、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、水浴锅、无水乙醇、乙酸乙酯。
酶液提取:
组织：按照组织质量（g）：提取液体积(ml)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1ml提取液），进行冰浴匀浆。10000g ，4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
测定操作表：
1、 分光光度计/酶标仪预热30min，调节波长至500nm。
2、 操作表
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对照管 |
测定管 |
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酶液（μl） |
40 |
40 |
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试剂一（μl） |
140 |
120 |
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试剂二（μl） |
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20 |
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试剂三（μl） |
20 |
20 |
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混匀，30℃反应30min |
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乙酸乙酯（μl） |
200 |
200 |
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37℃震荡10min，取上层溶液，N2吹干 |
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无水乙醇（μl） |
100 |
100 |
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充分震荡 |
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试剂四(μl) |
300 |
300 |
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混匀，25℃静置10min，于微量石英比色皿/96孔板中测定500nm处吸光值A。分别记为A对照管和A测定管，△A=A测定管-A对照管 |
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计算公式:
a． 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
标准曲线：y=0.0184x+0.0002，R2=0.999
（1）按照蛋白浓度计算
酶活性定义：在30℃，pH7.5条件下，每毫克蛋白每分钟分解二氢槲皮素产生1mmol儿茶素所需的酶量为一个酶活力单位。
DFR活性（mmol/min/mg prot）=（△A-0.0002）÷0.0184×V反总÷（V样×Cpr）÷T÷2
= 9.06×（△A-0.0002）÷Cpr
（2）按照样本质量计算
酶活性定义：在30℃，pH7.5条件下，每克组织每分钟分解二氢槲皮素产生1mmol儿茶素所需的酶量为一个酶活力单位。
DFR活性（mmol/min/g 鲜重）= （△A-0.0002）÷0.0184×V反总÷（V样×W÷V样总）÷T÷2
= 9.06×（△A-0.0002）÷W
V反总：反应总体积，1ml；V样：反应体系中样本体积，0.1ml；V样总：加入提取液体积，1ml；Cpr：样本蛋白浓度，mg/ml；W，样本质量，g；T：反应时间，30min
b．用96孔板测定的计算公式如下
标准曲线：y=0.0092x+0.0002，R2=0.999
（1）按照蛋白浓度计算
酶活性定义：在30℃，pH7.5条件下，每毫克蛋白每分钟分解二氢槲皮素产生1mmol儿茶素所需的酶量为一个酶活力单位。
DFR活性（mmol/min/mg prot）=（△A-0.0002）÷0.0092×V反总÷（V样×Cpr）÷T÷2
= 9.06×（△A-0.0002）÷Cpr
（2）按照样本质量计算
酶活性定义：在30℃，pH7.5条件下，每克组织每分钟分解二氢槲皮素产生1mmol儿茶素所需的酶量为一个酶活力单位。
DFR活性（mmol/min/g 鲜重）= （△A-0.0002）÷0.0092×V反总÷（V样×W÷V样总）÷T÷2
= 9.06×（△A-0.0002）÷W
V反总：反应总体积，1ml；V样：反应体系中样本体积，0.1ml；V样总：加入提取液体积，1ml；Cpr：样本蛋白浓度，mg/ml；W，样本质量，g；T：反应时间，30min