正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定                                             

测定意义：

二氢黄酮醇还原酶是类黄酮合成途径中的一个关键酶，在决定植物的花色、叶色、果色和其他经济器官的色泽及其营养品质方面起着重要作用。

测定原理：

二氢黄酮醇还原酶作用于二氢槲皮素产生儿茶素，可与香草醛缩合形成红色化合物，在500nm处有特征吸收峰。

组成：

试剂三：粉剂×1瓶，4℃保存。临用前加5ml蒸馏水溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。

自备仪器和用品：

研钵、低温离心机、震荡仪、氮吹仪、可见分光光度计、1ml玻璃比色皿、水浴锅、无水乙醇、乙酸乙酯。

酶液提取：

1. 组织：按照组织质量（g）：提取液体积(ml)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1ml提取液），进行冰浴匀浆。10000g ，4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

2. 液体：直接检测。

测定操作表

酶活性计算公式：

标准曲线：y=0.0184x+0.0002，R²=0.999

（1）按照蛋白浓度计算

酶活性定义：在30℃，pH7.5条件下，每毫克蛋白每分钟分解二氢槲皮素产生1mmol儿茶素所需的酶量为一个酶活力单位。

DFR活性（mmol/min/mg prot）=（△A-0.0002）÷0.0184×V反总÷（V样×Cpr）÷T÷2

= 9.06×（△A-0.0002）÷Cpr

（2）按照样本质量计算

酶活性定义：在30℃，pH7.5条件下，每克组织每分钟分解二氢槲皮素产生1mmol儿茶素所需的酶量为一个酶活力单位。

DFR活性（mmol/min/g 鲜重）= （△A-0.0002）÷0.0184×V反总÷（V样×W÷V样总）÷T÷2

= 9.06×（△A-0.0002）÷W

（3）按液体体积计算

酶活性定义：在30℃，pH7.5条件下，每毫升液体每分钟分解二氢槲皮素产生1mmol儿茶素所需的酶量为一个酶活力单位。

DFR活性（mmol/min/ml）=（△A-0.0002）÷0.0184×V反总÷V样÷T÷2

= 9.06×（△A-0.0002）

V反总：反应总体积，1ml；V样：反应体系中样本体积，0.1ml；V样总：加入提取液体积，1ml；Cpr：样本蛋白浓度，mg/ml；W，样本质量，g；T：反应时间，30min