产品信息

产品简介

SpCas9 来源于 S. pyogenes 菌株，是依赖于 crRNA 和 tracrRNA(或连接后形成的 sgRNA)引导的 DNA内切核酸酶，在靶标双链 DNA 存在 PAM(NGG)的情况下，特异地剪切靶标双链 DNA，使 DNA 双链断裂并生成平末端。PAM 对于 Cas9 的识别和剪切都是必需的，其剪切位点位于目标序列(target sequence)内，离 PAM 区 3 个碱基。此外，在 PAMmer 序列存在时，SpCas9 也能特异地剪切单链 DNA 或 RNA(详细信息请参考 PMID: 24476820；PMID: 25274302)。此酶还可应用于体外靶标 DNA 的剪切、目的片段的克隆等实验(详细信息可参考 PMID: 26323354) 。

产品组分

a. SpCas9 Nuclease 浓度为 10 μM，即 10 pmol/μL，100 pmol 规格的总体积为 10 μL，1,000 pmol 规格的总体积为 100 μL；

b. Control Target DNA and sgRNA 应保存于-80℃并避免反复冻融，必须在 6 个月内使用，使用时建议取 0.5 μL 至每 20 μL 反应体系。 n

保存条件

Control Target DNA and sgRNA 于-80℃储存，其余组分-20℃储存；≤ 0℃运输。 n

实验流程

1. 顺式剪切实验

*若用核酸电泳来分析顺式剪切产物，对于 20 μL 顺式剪切应体系，推荐 target DNA的使用量为 100 ng～500 ng，且 target DNA片段长度在 300 bp～3 kb 范围内。不同长度 target DNA 需要的 Cas 酶和 sgRNA 的量需要根据 target DNA 的摩尔量计算，建议保持 Cas 酶:sgRNA:target DNA的摩尔比为 10:10:1，以尽量确保 target DNA被剪切完全。

37℃反应 30 min~1 h，85℃灭活 5 min。核酸电泳分析顺式剪切产物。

实验结果

注意事项

1. 为防止 RNase 污染，请保持实验区干净整洁，操作时需穿戴干净的手套、口罩，实验所用枪头、离心管等耗材均为 RNase-free。

2. 因反应需添加 RNA(sgRNA 或者 crRNA:tracrRNA)，整个体系，包括 Cas9 酶都必需不含任何 RNase 活性。本产品经过严格质控，无任何其它核酸酶污染。

3. Cas9 酶对热敏感，容易失活，应全程冰上配置反应体系，使用后立即置于-20℃保存。

4. Cas9 酶与 DNA、sgRNA 形成复合物会影响电泳，需 85℃高温失活 Cas9 酶后电泳检测。

5. 本产品仅供科研使用。