产品信息

产品简介

目前常规的蛋白质组样品前处理过程存在着诸多问题，如重现性差、方法稳定性不好、灵敏度不高且非常耗时及无法自动化等。针对上述问题，沃博生物推出新一代“All In One Tube”的创新产品，本产品主要是针对微量蛋白（5-100 μg）的处理，即便是没有组学背景的科研人员，也可以快速的制备前处理的样品，可用于后续的质谱分析。

蛋白组学前处理试剂盒（YW006）实验流程图

产品组分及储存条件

有效期 1 年

操作流程

1.裂解（将 Lysis BufferⅠ和 Lysis Buffer Ⅱ 按 9 ：1 的体积比混合，混合后称为 Lysis Buffer）（用多少配多少，不提前预混储备）

① 取 50 μL 的 Lysis buffer 加入到含有样品的 EP 管中，震荡混匀。

② 将含有 Lysis buffer 的 EP 管水浴 95 ℃ 、10 min ，然后取出冷却至室温。

2.酶解

① 向冷却至室温的 EP 管中加入 225 μL 的 Balance buffer

② 加入 3 μL 的 Digest 后混匀，37 ℃ ,  1200 rpm ，震荡酶解，过夜（建议 16h）。

3.除盐（室温）

① 向样品中加入 25 μL 的 Stop buffer ，涡旋混匀。

② 再加入 320 μLWash buffer 1 ，剧烈震荡 3 min ，15000 rpm 离心 3 min ，将上层液体去除。

③ 将下层样品转入 Tip 柱中，2500 rpm/min ，离心 3-5 min ，直到液体全部离心下来，如果液体流速较慢，可以加大转速。

④ 向脱盐柱中加入 200 μL 的 Wash buffer 2（用之前震荡 10-20 s），2500 rpm/min ，离心 3-5 min ，直到液体全部离心下来。

⑤ 向脱盐柱中加入 200μL 的 Wash buffer 3 ，2500rpm/min ，离心 3-5 min ，直到液体全部离心下来。

⑥ 将脱盐柱重新放入一个新的 EP 管中，向脱盐柱中加入 200μL 的 Elution buffer，2000 rpm/min，离心 3-5 min，直到液体全部离心下来。

⑦ 重复步骤⑥ , 收集两次的洗脱液，冷冻干燥。

⑧ 加入 10μL 的 Loading buffer，剧烈涡匀 3 min，离心 20，000 g、10 min，取适量样品，即可质谱检测。以 HF-X 仪器为例，上样 0.5- 1μg 即可。

注意事项

1. Digest 分装后-20 ℃保存；

2. Lysis BufferⅠ和 Lysis BufferⅡ用多少配多少，不提前预混储备；

3.本产品仅限于专业人员的科学研究使用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品。

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