产品信息：

产品简介：

DiA 是一种细胞膜绿色荧光染料，它在细胞膜中的扩散速度比 DiO 快，并且经常和 DiI 一起使用于细胞膜双染色，属于亲脂性的荧光染料，可以用来染色细胞膜和其它脂溶性生物结构。DiA不溶于水，当它与细胞膜结合，其荧光强度会显著增强。一旦应用于细胞中，这种染料会在细胞内质膜中逐步扩散，最佳浓度时可以使整个细胞膜染色。DiA可与DiI联合使用进行神经元细胞的双色标记。研究发现，某些情况下当DiO不能标记固定组织时，DiA可得到良好的标记效果。DiA与磷脂双层膜结合后，光谱迁移明显加强。正由于其发射光谱非常广，在适当的滤光片下，可以绿色、橙色甚至红色荧光被检测到。DiA产品的光谱学相关参数为Ex=491nm，Em=613nm。

四种染料呈现不同的荧光颜色：DiI（橙色荧光）、DiO（绿色荧光）、DiD（红色荧光）、DiR（深红色荧光），为活细胞多色彩荧光成像分析和流式细胞术提供了一种便捷的工具。DiO和DiI分别用标准FITC和TRITC滤光器检测，可结合使用。DiD可被633 nm 氦-氖（He-Ne）激光激发，具有比DiI更长的激发和发射光波长，特别适合用于标记具本底荧光的细胞和组织。而，DiR在体内活体成像或者示踪中意义非凡，因其所发射的红外光可以高效地穿过细胞和组织，并且在红外光范围内，其本底荧光水平很低。

产品特性

CAS NO.：114041-00-8

化学名：[4-(4-(Dihexadecylamino)styryl)-N-methylpyridinium iodide]

分子式：C46H79IN2

分子量：787.04

纯度：≥98%（HPLC）

Ex/Em：491/613 nm

外观：红色固体

溶解性：溶于DMSO

保存条件：-20℃避光保存，一年有效。

使用方法：

染色液制备

a.配置DMSO储存液：储存液用DMSO配置浓度1～5 mM。

【注】：1未使用的储存液分装储存在-20℃，避免反复冻融，可稳定保存6个月。

必须保证所用溶剂新鲜无水。

工作液制备：用合适的缓冲液（如：无血清培养基，HBSS或PBS）稀释储存液，配制浓度为1～5 μM的工作液。

工作液最终浓度建议根据不同细胞系和实验体系来优化。

b. 悬浮细胞染色

1.加入适当体积的染色工作液重悬细胞，使其密度为1×106/mL。

2.37 ℃孵育细胞 2～20 min，不同的细胞最佳培养时间不同。可以20 min作为起始孵育时间，之后优化体系以得到均一的标记结果。

3.孵育结束，按1000～1500 rpm离心5 min。

4.倾倒上清液，再次缓慢加入37℃预热的生长培养液重悬细胞。

5.重复（3），（4）步骤两次以上。

c. 贴壁细胞的染色

1.将贴壁细胞培养于无菌盖玻片上。

2.从培养基中移走盖玻片，吸走过量培养液，将盖玻片放在潮湿的环境中。

3.在盖玻片的一角加入100 μL的染料工作液，轻轻晃动使染料均匀覆盖所有细胞。

4.37 ℃孵育细胞 2～20 min，不同的细胞最佳培养时间不同。可以20 min作为起始孵育时间，之后优化体系以得到均一的标记结果。

5.吸干染料工作液，用培养液洗盖玻片2～3次，每次用预温的培养基覆盖所有细胞，孵育5～10 min，然后吸干培养基。

d. 显微镜检测

☆DiD，DiO，DiI，DiR和DiS滤光器的选择参考表1。

☆多色染料的同时检测，滤光器按照以下设定：

DiI和DiO＝Omega XF52，Chroma 51004；

DiI和DiD＝Omega XF92，Chroma 51007；

DiI，DiO和DiD＝Omega XF93，Chroma 61005

注意事项

荧光染料均存在淬灭问题，染色过程需尽量避光。

为了您的健康，实验操作时请穿实验服和带一次性手套。

表1细胞膜探针光谱和滤镜编号: