产品信息：

产品简介：

DiI即DiIC18(3)，全称为1,1'-dioctadecyl-3,3,3',3'-tetramethylindocarbocyanineperchlorate，是最常用的细胞膜荧光探针之一，呈现橙红色荧光。DiI是一种亲脂性膜染料，进入细胞膜后可以侧向扩散逐渐使整个细胞的细胞膜被染色DiI在进入细胞膜之前荧光非常弱，仅当进入到细胞膜后才可以被激发出很强的荧光。DiI被激发后可以发出橙红色的荧光，DiI和磷酯双层膜结合后的激发光谱和发射光谱参考下图1。其中，最大激发波长为549nm，最大发射波长为565nm。

DiI可以溶解于无水乙醇、DMSO和DMF，溶解度约为1-2.5mg/ml。发现较难溶解时可以适当加热，用超声处理以促进溶解。 DiI被广泛用于正向或逆向的，活的或固定的神经等细胞或组织的示踪剂或长期示踪剂(long-termracer)。DiI通常不会影响细胞的生存力(viability)。被DiI标记的神经细胞在体外培养的条件下可以存活长达4周，在体内可以长达一年。DiI在经过固定的神经元细胞膜上的迁移速率为0.2-0.6mm/day，在活的神经元细胞膜上的的迁移速率为6mm/day。DiI除了最简单的细胞膜荧光标记外，还可以用于检测细胞的融合和粘附，检测发育或移植过程中细胞迁移，通过FRAP(Fluorescence Recovery After Photobleaching)检测脂在细胞膜上的扩散，检测细胞毒性和标记脂蛋白等。用于细胞膜荧光标记时，DiI的常用浓度为1-25μM，最常用的浓度为5-10μM。DiI可以直接染色活的细胞或组织，染色时间通常为5-20分钟。对于固定的细胞或组织，通常宜使用配制在PBS中的4%多聚甲醛进行固定，使用其它不适当的固定液会导致荧光背景较高。

四种染料呈现不同的荧光颜色：DiI（橙色荧光）、DiO（绿色荧光）、DiD（红色荧光）、DiR（深红色荧光），为活细胞多色彩荧光成像分析和流式细胞术提供了一种便捷的工具。DiO和DiI分别用标准FITC和TRITC滤光器检测，可结合使用。DiD可被633 nm 氦-氖（He-Ne）激光激发，具有比DiI更长的激发和发射光波长，特别适合用于标记具本底荧光的细胞和组织。而，DiR在体内活体成像或者示踪中意义非凡，因其所发射的红外光可以高效地穿过细胞和组织，并且在红外光范围内，其本底荧光水平很低。

图1：激发光谱和发射光谱

产品特性

CAS NO.：41085-99-8

化学名：1,1'-dioctadecyl-3,3,3',3'-tetramethylindocarbocyanineperchlorate

分子式：C59H97ClN2O4

分子量：933.88

纯度：≥98%（TLC）

Ex/Em：549/565 nm

外观：红色至暗红色，紫色至深紫色粉末

溶解性：DMF，DMSO，甲醇

保存条件：-20℃避光保存，一年有效。

使用方法：

染色液制备

a.配置DMSO储存液：储存液用DMSO配置浓度1～5 mM。

【注】：1未使用的储存液分装储存在-20℃，避免反复冻融，可稳定保存6个月。

必须保证所用溶剂新鲜无水。

工作液制备：用合适的缓冲液（如：无血清培养基，HBSS或PBS）稀释储存液，配制浓度为1～5 μM的工作液。

工作液最终浓度建议根据不同细胞系和实验体系来优化。

b. 悬浮细胞染色

1.加入适当体积的染色工作液重悬细胞，使其密度为1×106/mL。

2.37 ℃孵育细胞 2～20 min，不同的细胞最佳培养时间不同。可以20 min作为起始孵育时间，之后优化体系以得到均一的标记结果。

3.孵育结束，按1000～1500 rpm离心5 min。

4.倾倒上清液，再次缓慢加入37℃预热的生长培养液重悬细胞。

5.重复（3），（4）步骤两次以上。

c. 贴壁细胞的染色

1.将贴壁细胞培养于无菌盖玻片上。

2.从培养基中移走盖玻片，吸走过量培养液，将盖玻片放在潮湿的环境中。

3.在盖玻片的一角加入100 μL的染料工作液，轻轻晃动使染料均匀覆盖所有细胞。

4.37 ℃孵育细胞 2～20 min，不同的细胞最佳培养时间不同。可以20 min作为起始孵育时间，之后优化体系以得到均一的标记结果。

5.吸干染料工作液，用培养液洗盖玻片2～3次，每次用预温的培养基覆盖所有细胞，孵育5～10 min，然后吸干培养基。

d. 显微镜检测

☆DiD，DiO，DiI，DiR和DiS滤光器的选择参见表1。

☆多色染料的同时检测，滤光器按照以下设定：

DiI和DiO＝Omega XF52，Chroma 51004；

DiI和DiD＝Omega XF92，Chroma 51007；

DiI，DiO和DiD＝Omega XF93，Chroma 61005

注意事项

荧光染料均存在淬灭问题，染色过程需尽量避光。

为了您的健康，实验操作时请穿实验服和带一次性手套。

DiD 染色固定的细胞或组织样品时，样品宜使用配制在PBS 中的 4%多聚甲醛进行固定，使用其它不适当的固定液会导致荧光背景较高

表1细胞膜探针光谱和滤镜编号: