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昆虫细胞的转染试剂应当如何选择?

     转染试剂主要作用是辅助将质粒、DNA、siRNA、miRNA或蛋白质等外源物质输送到细胞内部,目前已成为研究和控制真核细胞基因功能的常规试剂。令人担忧的是,现在市面上的转染试剂种类繁多,质量参差不齐,那我们应该如何选择一款最适用于自己实验的转染试剂呢?

  昆虫细胞表达是一种用于产生具有简单翻译后修饰的蛋白质的平台。瞬时转染和重组杆状病毒的产生是昆虫细胞表达的常用方法。TransIT-Insect是一种无动物来源的转染试剂,专门针对各种昆虫细胞类型的高基因表达进行了优化。

 

转染试剂主要作用是辅助将质粒、DNA、siRNA、miRNA或蛋白质等外源物质输送到细胞内部,目前已成为研究和控制真核细胞基因功能的常规试剂。令人担忧的是,现在市面上的转染试剂种类繁多,质量参差不齐,那我们应该如何选择一款最适用于自己实验的转染试剂呢?

昆虫细胞表达是一种用于产生具有简单翻译后修饰的蛋白质的平台。瞬时转染和重组杆状病毒的产生是昆虫细胞表达的常用方法。TransIT®-Insect是一种无动物来源的转染试剂,专门针对各种昆虫细胞类型的高基因表达进行了优化。 

产品性能:

★ 特殊的DNA递送—在昆虫细胞类型中,包括Sf9、High Five™ 和S2

 

1. 使用TransIT®-Insect高效转染杆状病毒基因组DNA。6孔板里进行转染,每孔5 x 105 Sf9细胞,质粒和转染试剂比例1:3,使用0.5ug表达GFP的ProGreen™杆状病毒表达载体(AB Vector)和0.1 µg的pVL1393 转移载体(AB Vector). (A)转染后6天使用Zeiss S100荧光显微镜拍摄荧光和相位对比图像。(B) Merge。 

 

2. TransIT®-Insect的性能优于竞争对手的转染试剂。昆虫细胞系(A)Sf9,(B)High Five™, 和(C)果蝇S2细胞,在96孔板中用0.1µg由hr5增强子/IE1启动子驱动的荧光素酶表达质粒进行转染,使用指定试剂以指定试剂与DNA的比例(µl:µg)转染。在转染后48小时测量萤光素酶的表达。Sf9和High Five™在无血

★ 杆状病毒产量高—昆虫细胞中表达杆状病毒的理想选择

 

3. 使用TransIT®-Insect在High Five中的高效表达重组蛋白 。在6孔板中用2.5µg由hr5增强子/IE1启动子驱动的GFP表达质粒转染进High Five™ 细胞(Thermo Fisher Scientific) 。从转染后72小时的细胞制备总可溶性细胞裂解物。通过SDS-PAGE和考马斯蓝染色分析来自100µl培养物的裂解物;cells alone(未转 

 

4. 使用TransIT®-Insect高效表达蛋白。昆虫细胞系(A) Sf9,(B) High Five™和(C)果蝇S2在96孔板中转染 0.1 ug的荧光素酶表达质粒,转染试剂与质粒的比例为2:1。在转染后24、48和72小时三个时间点检测荧光素酶的表达。Sf9和High Five™细胞在无血清培养基中培养和转染;S2细胞置于含血清的培养基中。
★血清兼容—无动物来源的非脂质体配方,

★性价比高—每次转染所需的试剂量较低

产品信息:

Mirus 特色转染试剂

·TransIT®-Insect Transfection Reagent 昆虫细胞专用转染试剂,用于制备高滴度杆状病毒

货号

名称

规格

MIR 6104

TransIT®-Insect Transfection Reagent

0.4 ml

MIR 6100

TransIT®-Insect Transfection Reagent

1 ml

MIR 6105

TransIT®-Insect Transfection Reagent

5×1ml

MIR 6106

TransIT®-Insect Transfection Reagent

10×1 ml

瞬时转染和重组杆状病毒制备是昆虫细胞表达常用方法,TransIT®-Insect 是一款专用于多种昆虫细胞系的高效 DNA 转染试剂。

部分应用文献展示:

#1:Establishment of a Pseudovirus Platform for Neuraminidase Inhibiting Antibody Analysis.International Journal of Molecular Sciences (2023) 24:2376

Cell line:sf21

#2:MicroRNA miR-274-5p Controls Melanotic Mass Formation and Developmental Growth by Regulating the Found-in-Neurons-JNK Signaling Axis in Drosophila.Preprints (2023).

Cell Type: S2

#3:Baculovirus actin-based motility drives nuclear envelope disruption and nuclear egress.Current Biology (2018).

Cell line : High Five

#4:miR-34-5p, encoded by Spodoptera frugiperda, participates in anti-baculovirus by regulating innate immunity in the insect host.International Journal of Biological Macromolecules (2022) 222:2190

Cell Type: S9