一种RPA与CRISPR相结合的多靶标核酸检测微流控芯片

因 Cas12a 在 CRISPR 核酸检测过程中被激活后的非特异性切割特性限制了多靶点的检测。因此，作者设计了一种压力辅助的离心驱动的呼吸道病原体检测微流控芯片，该芯片可在 30 min 内完成 14 重检测。

如图 1，直径 80 mm 的芯片由 CNC 雕刻而成。该芯片含有 14 个独立的检测单元，一次可完成 14 个靶标检测。

图 1

芯片内环上有一个公用的弯曲流道，连接着 14 个检测单元，每个检测单元包括一个 RPA 扩增腔和一个 CRISPR 检测腔，用于单个靶标检测。

芯片最窄处的流体通道宽 0.2 mm，RPA 和CRISPR 检测腔的体积均为10 μL。

图 2

如图 3，弯曲流道与 RPA 腔之间的短流道逐渐加宽，以减少前后腔连接流道之间的流动阻力。同时，每个 RPA 腔与 CRISPR 检测腔之间的流道都是疏水的。

样本注入末端设有废液腔，用于存放进样后残留的液体。每个检测单元均设有通气孔，通气孔内装有高密度聚乙烯颗粒棉滤，以防气溶胶污染。

图 3

将特异性的 RPA 引物和 CRISPR 检测试剂冻干制成微球，预存于扩增腔和检测腔内。

将纯化后的核酸样品与rpa缓冲液、醋酸镁和无核酸酶水混合，形成 164 μl 的溶液。制备好加标体系后，用移液枪将164 μl 反应体系吸出，缓慢均匀地注入芯片中。

图4

操作时，通过加样口加入样品和冻干试剂复溶液，使其依次进入到扩增腔内。随后通过加样口加入石蜡油，将流道内残留的液体推入废液腔，并隔离扩增腔。

图 5

相关产品：

RPA试剂盒及试纸条系列：

Cas酶系列