急性呼吸道感染是儿童常见的呼吸道疾病，通常由病毒引起。呼吸道合胞病毒（RSV）和呼吸道腺病毒（ADV）是引起儿童急性呼吸道感染的两种常见病原体。轻度者可引起常见的感冒症状，如咳嗽和流鼻涕，而严重者可出现严重的并发症，如肺炎和中耳炎。根据世界卫生组织的建议，病原体的检测需要具备快速、准确、敏感、特异性的特点，不应依赖专门的技术人员或大型仪器。因此，开发一种能够满足上述检测要求的RSV和ADV的检测方法尤为重要。深圳儿童医院儿科研究所的马东礼主任课题组在《Scientific Reports》期刊上发表文章《A multiplex recombinase polymerase amplification assay combined with CRISPR/ Cas12a for the detection of respiratory syncytial virus and respiratory adenovirus》，影响因子4.6。
研究概述
将多酶恒温快速核酸扩增技术MIRA与CRISPR/Cas检测系统相结合。通过设计MIRA引物和CRISPR rna（crRNAs），多序列比较，优化反应条件，并使用荧光数值检测装置，验证灵敏度和特异性。并且以qPCR结果作为比较对照，研究了160例临床咽拭子样本的检测结果的一致性。
（MIRA-CRISPR/Cas12a检测法检测步骤示意图）
实验结果
1.MIRA-CRISPR/Cas12a检测方法灵敏度和特异性
在MIRA方法检测中，使用RSV-F1/R1引物对从RSV、ADV、PIV、RhV、MP、CP、FluB、hMPV、FluA或RSV/ADV合并感染患者的咽拭子样本中扩增核酸。除RSV和ADV有扩增条带，其他结果均为阴性，说明所选MIRA引物与检测的其他8种病原体未发生交叉反应，且保守性良好。随后，使用无菌水对RSV和ADV重组质粒进行10倍梯度稀释，对RSV和ADV的检测限均为106copies/mL。
（1-10：分别为RSV、RSV/ADV合并感染患者咽拭子样本以及其他呼吸道病原体样本）
（1-6：107至102稀释质粒DNA；7：阴性对照）
2.与qPCR做对比
与qPCR方法相比，RSV和ADV的检出限均为103copies/mL。
（qPCR检测RSV和ADV的灵敏度）
MIRA-CRISPR方法更适合基层实验室，检测时间短，操作简单，无需大型qPCR仪器即可完成实验操作。
3.临床样本对比
从急性呼吸道感染的儿童中采集咽拭子样本160例。同时使用MIRA-CRISPR方法、qPCR方法进行检测，并将结果与临床试验结果进行比较。与qPCR方法相比，MIRA-CRISPR方法对RSV和ADV的敏感性分别为98.1%和91.4%，检测特异性均为100%。Kappa值大于0.95，表明其一致性程度较高。
MIRA-CRISPR方法对RSV和ADV的检测具备快速、灵敏、特异性强的优势。它能及时准确地检测到病毒感染，更加适合于医疗资源匮乏的地区使用。
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安普未来生物介绍
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安普未来多酶恒温快速核酸扩增技术MIRA技术在恒温39°C-42°C下核酸扩增，反应时间仅为5-20 min。此外，不需要严格的实验室条件，应用场景多元化：综合医院检验科、基层医疗、居家检测、田间地头等。
试剂产品形态多样化：冻干粉、冻干微球等；显示结果的多样性：凝胶电泳、荧光曲线、胶体金试纸条等。试剂性能稳定、便于操作、方便存储运输。
并且安普未来生物以MIRA为核心平台技术研发出“超快速核酸释放技术”、“双通道恒温荧光检测仪”、“自测型核酸检测装置”等一系列配套产品，打造快速分子检测整体解决方案。
RPA试剂盒及试纸条系列：
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货号 |
产品 |
规格 |
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JY0209 |
双靶标HybriDetect侧向层析试纸条（彩虹型） |
50T |
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JY0201 |
单靶标HybriDetect侧向层析试纸条（彩虹型） |
50T |
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JY0307 |
Tiosbio® CRISPR单酶切及扩增产物检测试纸条 |
50T |
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JY0301 |
CRISPR Cas12/13 HybriDetect试纸条 |
50T |
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JY0308 |
Tiosbio® CRISPR双酶切检测试纸条（变色龙） |
50T |
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WLB8201KIT |
DNA恒温快速扩增试剂盒（基础型） |
48T |
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WLE8202KIT |
DNA恒温快速扩增试剂盒（荧光型） |
48T |
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WLN8203KIT |
DNA恒温快速扩增试剂盒（胶体金试纸条型） |
48T |
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WLRB8204KIT |
RNA恒温快速扩增试剂盒（基础型） |
48T |
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WLRE8205KIT |
RNA恒温快速扩增试剂盒（荧光型） |
48T |
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WLRN8206KIT |
RNA恒温快速扩增试剂盒（胶体金试纸条型） |
48T |
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WLB5001 |
DNA恒温快速扩增试剂盒（液体基础型） |
100T |
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WLN5002 |
DNA恒温快速扩增试剂盒（液体胶体金型） |
100T |
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WLR5003 |
DNA恒温快速扩增试剂盒（液体荧光型） |
100T |
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WLRB5001 |
RNA恒温快速扩增试剂盒（液体基础型） |
100T |
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WLRN5002 |
RNA恒温快速扩增试剂盒（液体胶体金型） |
100T |
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WLRE5003 |
RNA恒温快速扩增试剂盒（液体荧光型） |
100T
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Cas酶系列
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货号 |
包装规格 |
中文名称 |
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32108-01 |
100 pmoL |
LbCas12a (Cpf1) |
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32108-03 |
1,000 pmoL |
LbCas12a (Cpf1) |
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32117-01 |
100 pmoL |
LwaCas13a (C2c2) |
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32117-03 |
1,000 pmoL |
LwaCas13a (C2c2) |
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32118-01 |
100 pmoL |
AapCas12b (C2c1) |
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32118-03 |
1,000 pmoL |
AapCas12b (C2c1) |
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32119-01 |
100 pmoL |
Un1Cas12f1 (Cas14a1) |
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32119-03 |
1,000 pmoL |
Un1Cas12f1 (Cas14a1) |
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32104-01 |
100 pmoL |
AsCas12a (Cpf1) |
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32104-03 |
1,000 pmoL |
AsCas12a (Cpf1) |
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32116-01 |
100 pmoL |
AacCas12b (C2c1) |
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32116-03 |
1,000 pmoL |
AacCas12b (C2c1) |
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32106-01 |
100 pmoL |
FnCas12a (Cpf1) |
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32106-03 |
1,000 pmoL |
FnCas12a (Cpf1) |
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32110-01 |
100 pmoL |
Lb5Cas12a (Cpf1) |
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32110-03 |
1,000 pmoL |
Lb5Cas12a (Cpf1) |
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32101-01 |
100 pmoL |
SpCas9 |
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32101-03 |
1,000 pmoL |
SpCas9 |
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32102-01 |
100 pmoL |
Sp-dCas9 |
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32102-03 |
1,000 pmoL |
Sp-dCas9 |
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32120-01 |
100 pmoL |
Sp-nCas9（H840A） |
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32120-03 |
1,000 pmoL |
Sp-nCas9（H840A） |
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