细胞分选常见疑问？？

问题一

为什么建议磁珠分选而不是流式分选？

1)磁珠分选需要的设备简单，而流式分选需要配备分选型流式细胞仪，价格较为昂贵，而且流式分选对于操作员的技术要求很高，需要专门的培训并有一定的经验后才能很好地完成流式分选；

2)磁珠分选所需要的时间远小于流式分选所需要的时间；

3)磁珠分选对于目的细胞的刺激比流式分选要小，流式分选过程中需要对目的细胞所在的液滴通电，并且需要经过一个强电场的区域，对目的细胞的刺激相对较大；磁珠分选只是让细胞处于一个低磁场中，基本可以忽略对细胞的影响，从保持细胞活力的方面考虑，磁珠分选要优于流式分选。

因此，如果磁珠分选可以满足实验需求时，应尽量选择磁珠分选的方法。

问题二

磁珠分选为什么要求细胞活性越高越好？

1)死细胞分泌DNA，DNA有粘性，会将磁珠标记细胞和非标记细胞粘在一起，如果是阳选会影响纯度，如果是阴选会影响得率。

2)细胞活性低时可能会影响抗原抗体的结合效率。

问题三

磁珠分选buffer是什么？

autoMACS running buffer（自己配制：pH7.2 PBS，0.5％BSA、2mM EDTA，如需无菌，建议购买商品化buffer或紫外线照射，不建议高温高压灭菌）。

问题四

如果想分选的细胞有多个阳性marker怎么办？

可以选择磁珠分选阴选+阳选的方法，eg.分选小鼠脾脏naive CD4+T可以先用阴选的方法分到CD4+T细胞再用CD62L磁珠阳性分选；也可以用磁珠+流式的方法。

问题五

分选柱可以二次使用吗？

不建议，主要是分选柱内填充的铁珠在使用后易生锈。

问题六

 分选柱应如何选择？

不同的试剂盒对于MS/LS/LD柱的最大细胞上样量和最大磁性细胞吸附量是不同的，建议一定要参考说明书；

此外，如分选的目的细胞较大（eg.巨核细胞或fibroblast），可考虑采用large cell colums。