染色质免疫沉淀技术（Chromatin Immunoprecipitation，简称ChIP）——ChIP-IT® Express 染色质免疫共沉淀试剂盒
染色质免疫沉淀技术（Chromatin Immunoprecipitation，简称ChIP）是研究体内蛋白质与DNA相互作用的一种技术。其原理是：在生理状态下用甲醛把细胞内的DNA与蛋白质交联在一起，通过超声或酶处理将染色质切为均一的小片段后，利用抗原抗体的特异性识别反应，使用DNA结合蛋白特异性的抗体将目的蛋白和DNA复合物沉淀下来。复合物经过洗涤，解交联，蛋白酶K消化去除DNA结合蛋白，经纯化得到感兴趣的DNA片段。纯化的DNA片段可用于后续的分析，比如qPCR，测序，ChIP-chip，ChIP re ChIP等。
Active motif公司的ChIP-IT® Express试剂盒使用protein G包被的磁珠，代替传统的琼脂糖珠，使得ChIP实验可以在1天之内完成。试剂盒可以使用超声法或酶切法进行染色质的断裂处理。每种方法都提供快速、可重复的操作步骤，省时省力，实验者更容易获得成功的ChIP结果。
图1 ChIP-IT® Express试剂盒的操作流程
ChIP-IT® Express试剂盒的优点
● 组分完整——提供ChIP实验所需的所有试剂；
● 可用于检测蛋白/DNA的相互作用，不仅仅限于组蛋白的修饰；
● 与全基因组分析或PCR相关的方法兼容；
● 无需进行试剂和操作步骤的优化；
● 无需酚/氯仿抽提步骤——试剂盒包含DNA纯化柱，可对DNA进行快速纯化
传统的ChIP实验都是使用染色质组成相关的抗体，如乙酰化组蛋白抗体。然而对于启动子转录活性分析而言，这无法揭示出是哪种转录因子结合到我们感兴趣的启动子上。相比之下，使用转录因子特异性抗体，能够直接监测转录因子和DNA的相互作用，但是这种技术与传统的ChIP相比具有更大的挑战，需要准备多种复杂的缓冲液，抑制剂混合物和封闭试剂等。而且在缺少抗体、对照和验证的实验流程下，很难对ChIP结果进行验证。为了解决这些问题，使得ChIP实验同时适用于转录因子和组蛋白，Active motif公司的ChIP-IT® Express试剂盒提供ChIP实验所需的所有试剂，包括阳性对照和阴性对照，使得研究者更容易成功的操作ChIP。
图2: 改良的ChIP(使用ChIP-IT Express试剂盒)
PCR分析ChIP后的DNA。典型的ChIP实验每次需要2000,000个细胞，使用ChIP-IT Express试剂盒，仅需要100,000或更少的细胞既可获得阳性的ChIP结果。
用1%的甲醛固定Hela细胞10分钟，使用超声法破碎染色质，使用阴性对照IgG和RNA pol II抗体，对不同细胞数量来源（100,000到750,000个细胞）的染色质进行ChIP，重复2次。使用阳性对照引物GAPDH对ChIP后的DNA进行36个循环的PCR分析（抗体和引物包含在人ChIP-IT对照试剂盒里，Active motif也可以提供小鼠和大鼠对照试剂盒）。取10ul PCR产物进行1%凝胶电泳，EB染色后紫外观察。结果显示与使用阴性对照IgG相比，使用RNA pol II抗体的ChIP大量富集了GAPDH启动子区域的DNA序列。
相关产品信息
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供货商 |
产品编号 |
产品名称 |
规格 |
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Active Motif |
53008 |
ChIP-IT® Express |
25 rxns |
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Active Motif |
53009 |
ChIP-IT® Express Enzymatic |
25 rxns |
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供货商 |
产品编号 |
产品名称 |
规格 |
产品说明 |
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Active Motif |
53014 |
ChIP-IT® Protein G Magnetic Beads |
25 rxns |
Protein G包被的磁珠 |
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Active Motif |
53016 |
Re-ChIP-IT® |
25 rxns |
双重ChIP |
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Active Motif |
53018 |
ChIP-IT® Express HT |
96 rxns |
高通量ChIP,一次可同时使用96分样本 |
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Active Motif |
53019 |
Ready-to-ChIP Hep G2 Chromatin |
10 rxns |
即用型的ChIP实验用染色质 |
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Active Motif |
53020 |
Ready-to-ChIP K-562 Chromatin |
10 rxns |
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Active Motif |
53021 |
Ready-to-ChIP NIH/3T3 Chromatin |
10 rxns |
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Active Motif |
53015 |
Ready-to-ChIP HeLa Chromatin |
10 rxns |
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Active Motif |
53026 |
ChIP-IT® Control qPCR Kit – Human |
5 rxns |
ChIP对照试剂盒，包含阴性对照IgG和阳性对照 |
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RNA pol II抗体和PCR引物 |
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Active Motif |
53027 |
ChIP-IT® Control qPCR Kit – Mouse |
5 rxns |
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Active Motif |
53028 |
ChIP-IT® Control qPCR Kit – Rat |
5 rxns |
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Active Motif |
53010 |
ChIP-IT® Control Kit – Human |
5 rxns |
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Active Motif |
53011 |
ChIP-IT® Control Kit – Mouse |
5 rxns |
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Active Motif |
53012 |
ChIP-IT® Control Kit – Rat |
5 rxns |
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Active Motif |
53032 |
ChIP-IT® Express Shearing Kit |
10 rxns |
超声法染色质处理试剂盒 |
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Active Motif |
53035 |
ChIP-IT® Express Enzymatic Shearing Kit |
10 rxns |
酶切法染色质处理试剂盒 |
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Active Motif |
53040 |
ChIP-IT® High Sensitivity |
16 rxns |
高灵敏ChIP试剂盒，适用于低丰度转录因子、 |
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低亲和力抗体或有限的样本 |
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Active Motif |
53041 |
ChIP-IT® ChIP-Seq |
10 libraries |
ChIP-Seq剂盒 |
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Active Motif |
53045 |
ChIP-IT® FFPE |
16 rxns |
适用于福尔马林固定，石蜡包埋组织样本的ChIP |
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Active Motif |
53042 |
ChIP-IT® PBMC |
16 rxns |
适用于外周血单核细胞的ChIP |
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Active Motif |
53024 |
RNA ChIP-IT® |
25 rxns |
用于研究RNA与细胞核染色质的相互作用 |
QQ：1076801270 QQ:3570688425
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