近年来，可移动耐药基因的水平传播已经成为人兽共患病防控领域重点关注的问题。poxtA属于 ABC‑F蛋白家族，是介导肠球菌对利奈唑胺、酰胺醇类、四环素类多重耐药的关键基因。该基因可位于质粒、转座子等可移动遗传元件上，能够在不同革兰阳性菌之间发生转移，在动物源肠球菌中流行率持续上升，存在经食物链向人类传播的潜在风险，建立简便高效的基因型检测手段，对耐药监测工作十分关键。

传统的poxtA检测各有短板：药敏试验只能反映表型耐药；PCR、qPCR 灵敏度和特异性较好，但对仪器设备要求高；其他等温扩增技术，又存在引物设计复杂、试剂成本高、假阳性风险等现实问题。针对上述问题，石河子大学科研团队开发了一套重组酶介导等温扩增（RAA）‑琼脂糖凝胶电泳检测方法。

该研究以poxtA基因保守区域为靶点，首先设计4对RAA引物，筛选出扩增效果最优的引物组合。在此基础上，依次优化引物浓度、反应温度、反应时间三项核心条件。体系确立之后，从特异性、灵敏度、重复性三个维度完成方法学验证，最后利用 100 份鸡肛拭子临床样品，与常规 PCR、qPCR 两种成熟方法开展比对，评估该方法在实际样本中的应用效能。

1. 反应体系条件

研究筛选得到最优引物对poxtA‑F1/poxtA‑R1，扩增产物片段大小 225 bp。体系优化结果显示，该方法在30 ℃条件下 15 min 即可完成核酸扩增，25‑41℃宽温度区间都能够正常工作，甚至依靠人体体温就可以启动反应；扩增产物经 30 min 琼脂糖凝胶电泳，紫外成像观察特异性条带完成结果判读。

其中使用了沃博生物热销产品DNA恒温快速扩增试剂盒（DNA基础型）,货号B8201C1.

2. 方法学性能验证

特异性：仅poxtA阳性菌株能够扩增出目标条带；与tetA、optrA、fexA、blaNDM等多种耐药基因模板无交叉扩增，特异性表现良好。

灵敏度：该方法最低检测限可达 2.35 copies/μL，灵敏度较传统 PCR 提升约 1000 倍，有利于检出样本当中低拷贝的poxtA基因。

重复性：不同浓度模板的组内、组间重复试验，扩增条带清晰、亮度均一，证明体系稳定性可靠。

3. 临床样本比对结果

对100 份鸡肛拭子样品同步开展 RAA、PCR、qPCR 检测：RAA 与 qPCR 阳性检出率均为 11%，两者符合率 100%；RAA 与普通 PCR 符合率 99%。以 PCR 作为参照标准，敏感性 100%，特异性 98.9%，Kappa 值 0.95，和主流检测方法具备高度一致性。

从应用层面看，该RAA‑凝胶电泳方案无需热循环仪，只需要水浴设备，使用普通引物，不需要探针与专用试纸，检测成本相比 RAA‑荧光、RAA‑LFD 更低，更适配基层兽医实验室大批量样本筛查工作，也可与optrA、cfr等其他耐药基因 RAA 检测方法组合使用，完善动物源耐药基因监测体系。

同时文章也客观反映出该技术的固有不足：扩增结束后需要开盖进行电泳操作，会带来核酸气溶胶污染风险，实验过程必须严格执行分子生物学防污染操作规范；依靠凝胶成像判读，无法实现现场即时裸眼判读。

该研究立足基层监测的现实需求，建立并完整验证了poxtA的 RAA‑凝胶电泳检测体系。在保证特异性与灵敏度的前提下，降低了设备门槛，为动物源肠球菌poxtA耐药基因流行病学调查、食品安全风险监测提供了又一项可用的技术方案。