特点：

Bst4.0 Lyo Basic Bead为Bst4.0 PolymeraseIso Amp试剂的全体系冻干微球制品，含恒温扩增所需的反应缓冲液、Mg²⁺、dNTP、Bst 4.0 DNA/RNA Polymerase，不包含染料，使用时只需要加入引物、模板即可进行核酸恒温扩增。

Bst 4.0 DNA/RNA Polymerase具有DNA的聚合酶活性及依赖于RNA模板的聚合酶活性（逆转录），因此无论DNA或RNA样本，只需加入引物、模板，即可使用本品进行恒温扩增。该制品是进行LAMP及RT-LAMP扩增反应的绝佳试剂，可搭配OG橙绿变色管（货号：JY0404）实现LAMP扩增结果的可视化检测，也可自行搭配Sybr Green I、Eva Green、SYTO-9等其它荧光染料，实现LAMP扩增结果的可视化。

注意本试剂不支持HNB显色法、浊度、pH变色法！

包装量及储存条件：

BS0672包装量为100个。置于-20℃可保存2年。

该制品采用专用的冻干工艺制备而成，性质稳定，无需冷链运输，可于37℃放置2周，室温（25℃）稳定储存1年，而不影响产品性能。

使用方法（进行 LAMP 橙绿变色扩增）： 

每个冻干微球可用于25μL的反应体系，使用时只需加入ddH₂O、模板和引物即可进行反应。

1、 橙绿变色染料（OG Dye）以烘干的形式预加于OG 橙绿变色管（货号：JY0404）8 联管管盖上。LAMP反应完毕后，将 0.2mL EP管颠倒即可溶解管盖上的OG染料。反应结果为阳性时，OG Dye显色为绿色；反应结果为阴性时，OG Dye显色为深橙色。OG橙绿变色管可长期常温保存。

2、 配制变色LAMP反应体系：在0.2mL EP管内，按下表配制变色LAMP反应体系。

*注：（1）10×引物Mix包括16 μM FIP/BIP、2μM F3/B3、4~8μM LoopF/B； 

（2）全部试剂加入后，轻弹EP管底部，再盖上OG橙绿变色管（盖上管盖后绝对不可再剧烈混合与倒置EP管，以避免反应液溶解EP管盖上的OG染料，反应液中一旦混入OG染料将会终止 LAMP反应）；

（3）反应体系配制完成后，可在反应液表面覆盖一滴矿物油，以减少气溶胶的污染。矿物油不影响 OG 染料的溶解。

将反应液置于 65℃反应 15~30min，肉眼观察显色结果。阳性样品扩增产物显色为绿色，阴性样品或无扩增的样品显色为深橙色。LAMP扩增时间一般不超过30min。使用扩增情况良好的引物组合一般约20min即可完成扩增，并正常显色。

3、 观察结果：

    反应结束后，从加热装置中将反应管取出，室温放置2min，待反应管完全冷却后，再次用力扣压反应管管盖，以防液体泄露。将反应EP管倒置，轻甩手腕，以使反应液浸泡EP管盖上的 OG 染料，静置 1min（中间可轻弹1~2次，以加速溶解 OG染料）后，再正置EP反应管，并将反应液轻甩至EP管底部，此时阳性样品的扩增产物将显示为鲜艳的绿色，阴性或未发生扩增样品的扩增产物显示为深橙色。

    注意：①观察显色结果时，尽可能不共用反应液配制空间，以防止污染操作台；②高密封性EP管经65℃加热后，存在因EP管内气体膨胀所导致的液体泄露的可能。建议倒置反应管时，使用纸巾包裹 EP管，如发生液体泄露，可立即丢弃纸巾，避免台面受到污染；③整个试验操作均需佩戴手套、口罩等个人防护用品。

4、 注意事项：

（1） 如使用其它荧光染料，需要对染料的使用浓度进行优化！建议对染料浓度进行梯度显色试验（0.25 ~ 0.8×），以避免因使用过高浓度的染料所导致的显色反应失败。

（2） 本试剂不支持浊度、pH变色、HNB变色反应，请勿将试剂用于上述用途！

（3） LAMP成品全体系检测试剂的建议：Bst4.0 Lyo Basic Bead（货号：BS0674）和 OG 橙绿变色管（货号：JY0404）均可于室温稳定、长期保存。如制备全体系检测试剂，可将扩增引物①加至OG 橙绿变色管底部，并于 70°C 烘干，再加入一粒冻干球即可制备成全体系检测试剂；②与液体态试剂一起做成冻干球，并放入OG 橙绿变色管内即可。

（4） 本公司可提供液体状态的 OG dye（货号：JY0405）。制备LAMP成品全体系检测试剂时，可将液体状态的 OG dye加至成品试剂EP管的管盖上，与加至EP管底部的扩增引物同时进行烘干。