【产品用途】本产品可应用于核酸RNA的快速扩增。

【检测原理】本产品是基于重组酶介导链置换核酸扩增（Recombinase-aid Amplification，RAA）技术开发的恒温核酸扩增检测试剂，在42℃恒温条件下特异识别并扩增目标样本的RNA片段，可用Genchek 荧光检测仪实时监控扩增过程，5-20 min 即可完成扩增检测。

【技术原理】重组酶介导链置换核酸扩增（Recombinase-aid Amplification，RAA），是一种恒温核酸快速扩增技术。 RT-RAA先利用逆转录酶将 RNA 逆转录成 cDNA，从细菌或真菌中获得的重组酶在常温下可与引物DNA紧密结合，形成重组酶/引物复合体，侵入RNA-cDNA双链核酸模板，在侵入位点重组酶将双链打开，同时单链结合蛋白结合到被重组酶打开的单链上，维持双链模板处于开链状态。重组酶/引物复合体开始对双链进行扫描，当引物在模板上搜索到与之完全匹配的互补序列时，重组酶/引物复合体解体，DNA聚合酶结合到引物的3’端，开始合成新链。成的新链又可 以作为模板，最终扩增产物以指数级增长，完成靶标基因的扩增。经过荧光标记的探针与扩增产物结合，当探针被核酸外切酶酶切后发出荧光信号，可对扩增过程进行实时监控。本试剂盒具有快速、灵敏度高以及特异性强等优点，反应组分已混合并冷冻干燥成反应干粉，操作简便，易于保存。

【引物设计与探针设计】

引物设计建议方法：RAA核酸扩增技术对引物设计的要求与常规PCR引物设计有一定的区别。由两条寡核苷酸组成一对引物，分别特异性识别一个核酸目标物的上下游核苷酸序列；引物长度在30-35nt之间，序列中无回文序列、连续单碱基重复序列和内部二级结构区；引物Tm值不作为设计时主要考虑因素；最佳引物对需通过试验优化筛选得到，要求其扩增产物为单一条带，无非特异性扩增和明显的引物二聚体。

探针设计建议方法：探针序列不与引物识别位点重叠，长度在46-52 nt之间，序列避免回文序列、内部二级结构和连续的重复碱基；共有四个修饰位点，距离 5’端的≥35 nt的中部位置标记一个 dSpacer（四氢呋喃，THF），作为核酸外切酶的识别位点；THF 位点的上游标记一个荧光基团，下游标记一个淬灭基团，两个基团的间距为 2-4 nt，THF 距离3’末端≥15nt；在3’末端标记一个修饰基团，例如胺基、磷酸基团、生物素、生物素-TEG 或 C3-spacer。

建议：在开展 RT-RAA （荧光型）扩增反应之前，先进行引物的筛选试验， 以便得到较高的检测灵敏度

产品说明书：B8205C9 RNA恒温快速扩增试剂盒（RT-RAA荧光型）.pdf (168.6 K)