测定意义：

测定对象中各种抗氧化物质和抗氧化酶等构成总抗氧化水平。在生物学、医学和药学研究中常常检测血浆、血清、唾液、尿液等各种体液，细胞或组织等裂解液、植物或中草药抽提液及各种抗氧化物(antioxidant)溶液的总抗氧化能力。

测定原理：

在酸性环境下，抗氧化物质还原 Fe³⁺ -三吡啶三吖嗪(Fe³⁺ -TPTZ)产生蓝色的 Fe²⁺ -TPTZ 的能力反映了总抗氧化能力。

组成：

混合液(现配现用)：将试剂一、试剂二、试剂三按 10:1:1 的比例混合，使用前 37℃预温。

自备仪器和用品：

酶标仪、低温台式离心机、可调式移液器、96孔板、研钵、冰和蒸馏水。

样品的制备：

(1) 血清、血浆、唾液或尿液等液体样品

血浆（制备时可以使用肝素或柠檬酸钠抗凝，不宜使用 EDTA 抗凝）4℃，5000rpm 离心10min，取上清待测。血清、唾液或尿液样品直接用于测定，也可以-80℃冻存（不宜超过30 d）后再测定。

(2) 组织样品

按照组织质量（g）：提取液体积(ml)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1ml提取液）进行冰浴匀浆，然后 10000g，4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

(3) 细胞样品

按照细胞数量（10⁴个）：提取液体积（ml）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细胞加入1ml 提取液），冰浴超声波破碎（功率 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；10000g，4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

测定步骤：

1、 酶标仪预热30min以上，调节波长至593nm。

2、 样本测定

总抗氧化能力计算公式：

标准曲线：y = 1.2416x + 0.0134       R² = 0.9996        x:Trolox 浓度(μmol/ml)

y:吸光值差值△A

单位定义:用从标准曲线上获得的抗氧化剂 Trolox 的量来表示样本的总抗氧化能力。 

（1）按样本质量计算

总抗氧化能力（μmol Trolox/g 鲜重）=（△A-0.0134）÷1.2416×V 样÷(V 样÷V 样总×W)

=0.8054×（△A-0.0134）÷W

（2）按样本蛋白浓度计算

总抗氧化能力（μmol Trolox/mg prot）=（△A-0.0134）÷1.2416×V 样÷(V 样÷V 样总×Cpr)

=0.8054×（△A-0.0134）÷Cpr

（3）按细胞计算

总抗氧化能力（μmol Trolox/10⁴cell）=（△A-0.0134）÷1.2416×V 样÷（V 样÷V 样总×细胞数

量（万个））

= 0.8054×（△A-0.0134）÷ 细胞数量（万个）

（4）按液体体积计算

总抗氧化能力（μmol Trolox/ml）=（△A-0.0134）÷1.2416

=0.8054×（△A-0.0134）

V 样总：加入提取液体积，1 ml；V 样：反应中样品体积，10μL；W：样品质量，g；

Cpr：样本蛋白浓度，mg/ml 

注意事项：

1. 试剂二对人体有刺激性，请采取适当的防护措施。为了您的安全和健康，请穿实验服并戴乳胶手套操作。

2. 尽量避免使用在酸性条件下呈蓝色或接近蓝色的试剂，否则对本试剂盒的检测结果产生干扰。

3. 样品中不宜添加 Tween、Triton 和 NP-40 等去垢剂和 DTT、巯基乙醇等影响氧化还原反应的还原剂