正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义：

样品可溶性蛋白质含量常常用于酶活性计算。此外，可溶性蛋白质含量也用于食品等质量分析。

测定原理：

碱性条件下，蛋白质中半胱氨酸、胱氨酸、色氨酸、酪氨酸以及肽键，能将Cu²⁺还原成Cu⁺ ；2分子的BCA与Cu⁺ 结合，生成紫色络合物，在540-595nm有吸收峰，562nm处吸收峰最强。

自备仪器和用品：

台式离心机、恒温水浴锅、可见分光光度计、移液器、1ml玻璃比色皿和蒸馏水。

组成：

工作液配制：临用前请根据拟用工作液体积（样本数×1ml），将试剂A和B按照50:1的比例混合，盖紧后充分混匀。

样品中可溶性蛋白质提取：

1、液体样品：澄清无色液体样品可以直接测定。

2、组织样品：按照组织质量（g）:提取液体积（ml）为1:5～10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1ml提取液）自备，根据需要选用酶提取缓冲液或者蒸馏水或者生理盐水

   冰浴匀浆，8000g，4℃离心10min，取上清，即待测液。

3、细菌、真菌：按照细胞数量（10⁴ 个）：细菌、细胞：按照细胞数量（10⁴ 个）：提取液体积（ml）为500～1000:1的比例（建议500万细胞加入1ml提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300W，超声3秒，间隔7秒，总时间3分钟）；然后8000g，4℃，离心10min,取上清置于冰上待测。

测定步骤：

1. 分光光度计/酶标仪预热30min，调节波长到562nm，蒸馏水调零。

2. 工作液置于60℃水浴预热30min.

注意：空白管和标准管只需要做一次

计算公式：

Cpr(mg/ml)= C标准品×（A测定管-A空白管）÷（A标准管-A空白管）

          = 0.5×(A测定管-A空白管）÷（A标准管-A空白管）

Cpr(mg/g)= C标准品×（A测定管-A空白管）÷（A标准管-A空白管）÷W

         = 0.5×（A测定管-A空白管）÷（A标准管-A空白管）÷W

W:样本质量,g

注意事项：

BCA法蛋白质含量测定试剂盒，适用于测定蛋白浓度在20-5000μg/ml样品。测定前取1-2个样做预实验，若A测定管-A空白管>1.5，需将样本用提取液稀释后再测定，以确保测定的准确性。