测定意义：

锌是必需的微量元素之一，在胰岛素和卟啉代谢中也起重要作用。

测定原理：

在pH 8.5~9.5的溶液中，Zn²⁺与锌试剂生成蓝色配位化合物，在620nm有最大吸收峰。

组成：

试剂三：粉剂×1瓶，4℃保存。临用前1天配制，加入25 ml无水乙醇充分溶解，盖紧，过夜待用。4℃保存可稳定约1个月，如颜色变黄，则已失效。

标准液：液体1ml×1支，10 μ mol/L Zn²⁺标准液。4℃保存。

自备仪器和用品：

可见分光光度计、离心机、可调式移液枪、1ml玻璃比色皿、蒸馏水和无水乙醇。

测定操作：

1. 分光光度计预热30 min，调节波长到620 nm，蒸馏水调零。

2. 标准液解冻：提前取出标准液，置于室温下充分解冻后混匀。

3. 空白管：取EP管，依次加入500 μl蒸馏水，1000 μl试剂一，混匀；室温，8000g，离心10min，小心吸取上清液500 μl，加入1ml玻璃比色皿，加入500μl试剂二，500μl试剂三，充分混匀后25℃静置10min，于620 nm测定吸光度，记为A空白管。

4. 标准管：取EP管，依次加入500 μl标准液，1000 μl试剂一，混匀；室温，8000g，离心10min，小心吸取上清液500 μl，加入1ml玻璃比色皿，加入500μl试剂二，500μl试剂三，充分混匀后25℃静置10min，于620 nm测定吸光度，记为A标准管。

5. 测定管：取EP管，依次加入500 μl血清，1000 μl试剂一，混匀；室温，8000g，离心10min，小心吸取上清液500 μl，加入1ml玻璃比色皿，加入500μl试剂二，500μl试剂三，充分混匀后25℃静置10min，于620 nm测定吸光度，记为A测定管。

注意：空白管和标准管只需测定一次。

血锌浓度计算公式：

血锌浓度（μ mol/ L）=[C标准液×(A测定管－A空白管)÷(A标准管－A空白管)]

= 10×(A测定管－A空白管)÷(A标准管－A空白管)

C标准液：10 μ mol/L Zn²⁺；

注意事项：

1. 试剂三需提前一天配制，如变黄色则不能再使用。

2. 加入试剂三混匀后，要在30 min内完成测定。

3. 最低检出限为1μ mol/L。