肉毒碱棕榈酰转移酶（CPT-1）检测试剂盒（微量法100T/96S）
| 货号 | SH0489 | 售价（元） | 3600 |
| 规格 | 100T/96S | CAS号 |
- 产品简介
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货号 |
名称 |
规格 |
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SH0489 |
肉毒碱棕榈酰转移酶（CPT-1）检测试剂盒（微量法100T/96S） |
100管/96样 |
测定意义：
肉毒碱棕榈酰转移酶是存在于线粒体内膜的一类酰基转移酶。可逆地催化从酰基辅酶A将酰基转移至L-肉毒碱的反应，在转运脂肪酸通过线粒体内膜的过程中起重要作用。
测定原理：
基于肉碱和脂酰辅酶A在丙二酰辅酶A存在与否的条件下，通过肉碱脂酰转移酶(CPT-I)的作用，产生脂酰肉碱，并释放出巯基辅酶A(COA-SH)，与Ellman试剂DN-TB反应后，产生黄色的TNB。通过其吸收峰值得变化（412nm），来定量分析CPT-1的活性。
组成：
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产品名称 |
SH0489-100T/96S |
Storage |
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试剂一：液体 |
100ml |
-20℃ |
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试剂二：液体 |
20ml |
-20℃ |
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试剂三：液体 |
1.5ml |
-20℃ |
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试剂四：液体 |
30ml |
4℃ |
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试剂五：粉剂 |
1瓶 |
4℃ |
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试剂六：粉剂 |
1支 |
-20℃ |
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说明书 |
一份 |
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自备仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰、无水乙醇和蒸馏水
样本的前处理：
组织、细菌或细胞中胞浆蛋白与线粒体蛋白的分离：
① 称取约0.1g组织或收集500万细胞，加入1ml试剂一和10μl 试剂三，用冰浴匀浆器或研钵匀浆。
② 将匀浆液于600g，4℃离心5min。
③ 弃沉淀，将上清液移至另一离心管中，11000g，4℃离心10min。
④ 上清液即胞浆提取物，可用于测定从线粒体泄漏的CPT-1（此步可选做）。
⑤ 在步骤④的沉淀中加入200μl试剂二和2μl 试剂三，超声波破碎（冰浴，功率20％或200W，超声3秒，间隔10秒，重复30次），用于线粒体CPT-1测定。
测定步骤：
1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至412nm，蒸馏水调零。
2、样本测定
（1）在试剂五中加入1ml无水乙醇，混匀，再加入22ml试剂四，混匀，37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）孵育5min；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融；
（2）在试剂六中加入1ml蒸馏水，混匀，37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）孵育5min；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融；
（3）在微量石英比色皿或96孔板中加入10μl样本、220μl试剂五和10μl试剂六，混匀，记录412nm处20秒时的初始吸光度A1和2分20秒时的吸光度A2，计算ΔA=A2-A1。
CPT-1活性计算：
a. 使用微量石英比色皿测定的计算公式如下：
（1）按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：每mg组织蛋白每分钟催化产生1 nmol TNB定义为一个酶活力单位。
CPT-1（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷(V样×Cpr) ÷T=880×ΔA÷Cpr
此法需要自行测定样本蛋白质浓度。
（2）按样本鲜重计算：
单位的定义：每g组织每分钟催化产生1 nmol TNB定义为一个酶活力单位。
CPT-1（nmol/min/g 鲜重）=[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷（W× V样÷V样总）÷T=177.8×ΔA÷W
（3）按细菌或细胞密度计算：
单位的定义：每1万个细菌或细胞每分钟催化产生1 nmol TNB定义为一个酶活力单位。
CPT-1（nmol/min/104 cell）=[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷（500×V样÷V样总）÷T=0.3556×ΔA
V反总：反应体系总体积，2.4×10-4 L；ε：TNB摩尔消光系数，1.36×104 L / mol /cm；d：比色皿光径，1cm；V样：加入样本体积，0.01 ml；V样总：加入提取液体积，0.202 ml；T：反应时间，2 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/ml；W：样本质量，g；500：细胞或细菌总数，500万。
b. 使用96孔板测定的计算公式如下：
（1）按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：每mg组织蛋白每分钟催化产生1 nmol TNB定义为一个酶活力单位。
CPT-1（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷(V样×Cpr) ÷T=1760×ΔA÷Cpr
此法需要自行测定样本蛋白质浓度。
（2）按样本鲜重计算：
单位的定义：每g组织每分钟催化产生1 nmol TNB定义为一个酶活力单位。
CPT-1（nmol/min/g 鲜重）=[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷（W ×V样÷V样总）÷T=355.6×ΔA÷W
（3）按细菌或细胞密度计算：
单位的定义：每1万个细菌或细胞每分钟催化产生1 nmol TNB定义为一个酶活力单位。
CPT-1（nmol/min/104 cell）=[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷（500×V样÷V样总）÷T=0.711×ΔA
V反总：反应体系总体积，2.4×10-4 L；ε：TNB摩尔消光系数，1.36×104 L / mol /cm；d：96孔板光径，0.5cm；V样：加入样本体积，0.01 ml；V样总：加入提取液体积，0.202 ml；T：反应时间，2 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/ml；W：样本质量，g；500：细胞或细菌总数，500万。