锰过氧化物酶（Mnp）检测试剂盒（微量法100T/96S）
| 货号 | SH0436 | 售价（元） | 1200 |
| 规格 | 100T/96S | CAS号 |
- 产品简介
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货号 |
名称 |
规格 |
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SH0436 |
锰过氧化物酶（Mnp）检测试剂盒（微量法100T/96S） |
100T/96S |
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
锰过氧化物酶（EC1.11.1.13）是一种含亚铁血红素的过氧化物酶，主要存在于担子菌中，属于木质素降解酶系，能有效的降解木质素及废水和土壤中比较难降解的氯化物，叠氮化合物、DTT，多环芳烃等。
测定原理：
锰过氧化物酶在Mn2+存在的条件下，将愈创木酚氧化为四邻甲氧基连酚，在465nm有特征吸收峰。
试剂组成和配制：
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产品名称 |
SH0436-100T/96S |
Storage |
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试剂一：液体 |
110ml |
4℃ |
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试剂二：液体 |
2ml |
4℃ |
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试剂三：液体 |
5ml |
4℃避光 |
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试剂四：液体 |
2ml |
4℃ |
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说明书 |
一份 |
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需自备仪器和用品：
天平、研钵、低温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、恒温水浴锅。
酶液提取：
1、组织：按照质量（g）：试剂一体积(ml)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g，加入1ml试剂一）加入试剂一，冰浴匀浆后于4℃，10000g离心10min，取上清置于冰上待测。
2、细胞：按照细胞数量（104个）：试剂一体积（ml）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1ml试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后4℃，10000g离心10min，取上清置于冰上待测。
3、培养液或其它液体：直接检测。
测定步骤：
1、分光光度计预热30min以上，调节波长至465nm，蒸馏水调零。
2、测定前将试剂一、二、三、四在37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）放置10min以上。
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试剂名称（µl） |
测定管 |
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样本 |
20 |
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试剂一 |
100 |
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试剂二 |
20 |
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试剂三 |
40 |
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试剂四 |
20 |
在微量石英比色皿或96孔板中按顺序加入上述试剂，立即混匀并计时，记录465nm下30s时的吸光值A1和2min30s后的吸光值A2。计算ΔA＝A2-A1。
注意事项
若一次性测定样本较多，可将试剂一、二、三、四按比例配成混合液，在37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）放置10min以上，测定时加入20µl样本和180µl混合液测定。
酶活计算公式：
a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下
1．按照蛋白浓度计算
酶活性定义：每毫克蛋白每分钟氧化1nmol愈创木酚所需的酶量为一个酶活力单位。
MnP活性（nmol/min/mg prot）= [ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷(V样×Cpr) ÷T=413×ΔA÷Cpr
2．按照样本质量计算
酶活性定义：每克样品每分钟氧化1nmol愈创木酚所需的酶量为一个酶活力单位。
MnP活性（nmol/min/g 鲜重）= [ΔA×V反总÷（ε×d）×109] ÷（V样×W÷V样总）÷T= 413×ΔA÷W
3．按照细胞数量计算
酶活性定义：每104个细胞每分钟氧化1nmol愈创木酚所需的酶量为一个酶活力单位。
MnP活性（nmol/min/104 cell）=[ΔA×V反总÷（ε×d）×109] ÷（V样×细胞数量÷V样总）÷T
= 413×ΔA÷细胞数量
4．按照液体体积计算
酶活性定义：每毫升培养液每分钟氧化1nmol愈创木酚所需的酶量为一个酶活力单位。
MnP活性（nmol/min/ml）= [ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷V样÷T= 413×ΔA
ε：愈创木酚摩尔消光系数：12100L/mol/cm；d：比色皿光径，1cm；V反总：反应总体积，2×10-4 L；V样：反应中样本体积，0.02ml；V样总：加入提取液体积，1ml；Cpr：样本蛋白浓度，mg/ml；W：样本质量，g；T：反应时间，2min
b.用96孔板测定的计算公式如下
1．按照蛋白浓度计算
酶活性定义：每毫克蛋白每分钟氧化1nmol愈创木酚所需的酶量为一个酶活力单位。
MnP活性（nmol/min/mg prot）= [ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷(V样×Cpr) ÷T=826×ΔA÷Cpr
2．按照样本质量计算
酶活性定义：每克样品每分钟氧化1nmol愈创木酚所需的酶量为一个酶活力单位。
MnP活性（nmol/min/g 鲜重）= [ΔA×V反总÷（ε×d）×109] ÷（V样×W÷V样总）÷T= 826×ΔA÷W
3．按照细胞数量计算
酶活性定义：每104个细胞每分钟氧化1nmol愈创木酚所需的酶量为一个酶活力单位。
MnP活性（nmol/min/104 cell）=[ΔA×V反总÷（ε×d）×109] ÷（V样×细胞数量÷V样总）÷T
= 826×ΔA÷细胞数量
4．按照液体体积计算
酶活性定义：每毫升培养液每分钟氧化1nmol愈创木酚所需的酶量为一个酶活力单位。
MnP活性（nmol/min/ml）= [ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷V样÷T= 826×ΔA
ε：愈创木酚摩尔消光系数：12100L/mol/cm；d：96孔板光径，0.5cm；V反总：反应总体积，2×10-4 L；V样：反应中样本体积，0.02ml；V样总：加入提取液体积，1ml；Cpr：样本蛋白浓度，mg/ml；W：样本质量，g；T：反应时间，2min。