植酸酶（phytase）检测试剂盒(微量法100T/48S)
| 货号 | SH0434 | 售价（元） | 1176 |
| 规格 | 100T/48S | CAS号 |
- 产品简介
- 相关产品
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货号 |
名称 |
规格 |
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SH0434 |
植酸酶（phytase）检测试剂盒(微量法100T/48S) |
100T/48S |
测定意义：
植酸酶（phytase）是催化植酸及其盐类水解为肌醇与磷酸（盐）的一类酶的总称，属磷酸单酯水解酶，它能将食品和饲料中植酸及其盐转化为可供有机体利用的有效磷，降低粪便中的磷含量，减轻对环境的污染，改善营养成分的吸收和利用，因此具有极其广泛的研究和应用价值。
测定原理：
植酸酶在一定温度和pH值条件下，水解底物植酸钠生成无机磷与肌醇衍生物，无机磷在酸性环境中与钼酸铵显色剂反应生成蓝色复合物，在700nm处有特征吸收峰，根据700nm处吸光值变化可计算得植酸酶活性。
试剂组成和配制：
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产品名称 |
SH0434-100T/48S |
Storage |
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提取液：液体 |
100ml |
4℃ |
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缓冲液：液体 |
15ml |
4℃ |
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试剂一：粉剂 |
1支 |
4℃ |
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试剂二：液体 |
15ml |
4℃ |
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显色剂：粉剂 |
8瓶 |
4℃ |
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说明书 |
一份 |
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试剂一：粉剂×1支，4℃保存，临用前加缓冲液6ml配制，现用现配；用不完的试剂4℃保存一个月。
显色剂：粉剂×8瓶，4℃保存，临用前根据用量每瓶加0.4ml双蒸水溶解，再加1.6ml试剂二混匀。
需自备仪器和用品：
天平、低温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、恒温水浴锅，超声溶解器，回旋式振荡器。
样本处理：
1. 酶制剂：按照质量（g）：提取液体积(ml)为1：500~1000的比例（建议称取约0.001g，加入1ml提取液）加入提取液，在超声波溶解器上溶解15min，再用回旋式振荡器振荡15min，待测。
2. 组织：按照质量（g）：提取液体积(ml)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g，加入1ml提取液）进行冰浴匀浆，在超声波溶解器上溶解15min，再用回旋式振荡器振荡15min，4℃，4000g离心10min，取上清待测。
3. 饲料样品：饲料烘干粉碎，过40目筛，按照质量（g）：提取液体积(ml)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g，加入1ml提取液）进行冰浴匀浆，在超声波溶解器上溶解15min，再用回旋式振荡器振荡15min，4℃，4000g离心10min，取上清待测。
4. 培养液等液体样品，混匀直接测定。
测定步骤：
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试剂名称(µl) |
对照管 |
测定管 |
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样本（µl） |
30 |
30 |
37℃温育5min
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缓冲液（µl） |
120 |
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试剂一（µl） |
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120 |
混匀，37℃温育30min，95℃，10min终止反应，冷却至室温
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显色剂（µl） |
150 |
150 |
混匀，37℃静置15min，10000g，室温，离心5min，取上清200µl，测定700nm处吸光值，△A=A测定管-A对照管。每个测定管设一个对照管。
注意事项
1、显色剂需要临用前根据用量配制，每一瓶是13个样本的用量，新配制的显色剂若有颜色则已经污染或者试剂过期，应放弃使用。
2、ΔA线性范围为0.01-1。
酶活性计算公式：
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
标准曲线：y = 0.2764x + 0.0082，R2 = 0.9998；x为标准品浓度（μmol/ml），y为吸光值。
1． 按照蛋白浓度计算
酶活性定义：在37℃，pH5.5的条件下，每毫克蛋白每分钟从5mmol/L的植酸钠溶液中释放出1μmol的无机磷为一个酶活力单位。
植酸酶活性（μmol/min/mg prot）=（△A-0.0082）÷0.2764÷Cpr÷T =0.1206×（△A-0.0082）÷Cpr
2．按照样本质量计算
酶活性定义：在37℃，pH5.5的条件下，每克样本每分钟从5mmol/L的植酸钠溶液中释放出1μmol的无机磷为一个酶活力单位。
植酸酶活性（μmol/min /g 鲜重）=（△A-0.0082）÷0.2764÷W÷T =0.1206×（△A-0.0082）÷W
3. 培养液等液体样品
酶活性定义：在37℃，pH5.5的条件下，每毫升液体每分钟从5mmol/L的植酸钠溶液中释放出1μmol的无机磷为一个酶活力单位。
植酸酶活性（μmol/min /ml）=（△A-0.0082）÷0.2764÷T =0.1206×（△A-0.0082）
Cpr：样本蛋白含量，mg/ml；W：样本质量，g；T：反应时间，30min。
b. 用96孔板测定的计算公式如下
标准曲线：y = 0.1382x + 0.0082，R2 = 0.9998；x为标准品浓度（μmol/ml），y为吸光值。
1.按照蛋白浓度计算
酶活性定义：在37℃，pH5.5的条件下，每毫克蛋白每分钟从5mmol/L的植酸钠溶液中释放出1μmol的无机磷为一个酶活力单位。
植酸酶活性（μmol/min/mg prot）=（△A-0.0082）÷0.1382÷Cpr÷T = 0.2412×（△A-0.0082）÷Cpr
2．按照样本质量计算
酶活性定义：在37℃，pH5.5的条件下，每克样本每分钟从5mmol/L的植酸钠溶液中释放出1μmol的无机磷为一个酶活力单位。
植酸酶活性（μmol/min /g 鲜重）=（△A-0.0082）÷0.1382÷W÷T =0.2412×（△A-0.0082）÷W
3. 培养液等液体样品
酶活性定义：在37℃，pH5.5的条件下，每毫升液体每分钟从5mmol/L的植酸钠溶液中释放出1μmol的无机磷为一个酶活力单位。
植酸酶活性（μmol/min /ml）=（△A-0.0082）÷0.1382÷T =0.2412×（△A-0.0082）
Cpr：样本蛋白含量，mg/ml；W：样本质量，g；T：反应时间，30min。