测定意义：

速效磷是土壤中可被植物吸收的磷组分，包括全部水溶性磷、部分吸附态磷及有机态磷，土壤中速效磷是限制植物生长主要因子之一。

测定原理：

用双酸法提取酸溶性磷和吸附态磷，用钼锑抗比色法测定。

试剂组成和配制：

试剂二： 粉剂×1支，4℃避光保存。临用前加2ml蒸馏水溶解。用不完的试剂4℃保存。

试剂三： 粉剂×3支，4℃避光保存。临用前加1ml蒸馏水溶解。现配现用。

自备仪器和用品：

天平、常温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、震荡仪。

样本处理：

新鲜土样风干，过30-50目筛，按照土壤质量（g）：提取液体积(ml)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g土样，加入1ml提取液），振荡提取30min，10000g ，25℃离心10min，取上清液待测。

测定步骤：

1、取试剂三一支，加入1ml蒸馏水充分溶解待用。

2、显色液的配制（可测50个样）：取EP管一支，加入660μl试剂一，再加入100μl试剂二，充分混匀后，再加入240μl试剂三，充分混匀待用；配好的显色液应为黄色，若变蓝则为磷污染；显色液必须现配现用；若一次性测不了50个样，可按比例缩小各试剂体积。

3、操作表：

计算公式：

a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下

标准曲线：y =0.1252x-0.0041，R² = 0.9957，x为标准品浓度（mg/L），y为吸光值。

速效磷含量（mg/kg干重）=（△A+0.0041）÷ 0.1252×V样÷（W×V样÷V样总）

                     = 7.987×（△A+0.0041）÷W

V样：样本体积，0.04ml；V样总：加入提取液体积，1ml，W：样本质量，约0.1g

b. 用96孔板测定的计算公式如下

标准曲线：y =0.0626x-0.0041，R² = 0.9957，x为标准品浓度（mg/L），y为吸光值。

速效磷含量（mg/kg干重）=（△A+0.0041）÷ 0.0626×V样÷（W×V样÷V样总）

                     = 15.97×（△A+0.0041）÷W

V样：样本体积，0.04ml；V样总：加入提取液体积，1ml，W：样本质量，约0.1g

注意事项：

1、配好的显色液当天用完，变蓝则不能使用。

2、ΔA线性范围为：0.01-1.5。

3、标准曲线线性范围为：0.1mg/L-20mg/L。