测定意义：

GS（EC 6.3.1.2）主要存在于植物中，是生物体内氨同化的关键酶之一，催化铵离子和谷氨酸合成谷氨酰胺，不仅可以防止过多的铵离子对生物有毒性，而且谷氨酰胺也是氨的主要储存和运输形式。

测定原理：

GS在ATP和Mg²⁺存在下，催化铵离子和谷氨酸合成谷氨酰胺；谷氨酰胺进一步转化为γ─谷氨酰基异羟肟酸，在酸性条件下形成的络合物在540nm处有最大吸收峰，可用分光光度计测定。

组成：

试剂一临用前37℃预热20min，充分混匀，如有沉淀，静置10min，取上清待用。

试剂二临用前37℃预热20min，充分混匀，如有沉淀，静置10min，取上清待用。

试剂三用时每瓶加入5ml蒸馏水充分溶解待用。

自备仪器和用品：

可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1 ml玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

样本测定的准备：

1、细菌、细胞或组织样品的制备：

细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（10⁴个）：提取液体积（ml）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1ml提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

组织：按照组织质量（g）：提取液体积(ml)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1ml提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

2、血清（浆）样品：直接检测。

测定步骤：

1、分光光度计预热30min以上，调节波长至540nm，蒸馏水调零。

2、在EP管中加入下列试剂：

  混匀，37℃（哺乳动物）或25℃（其他物种）准确水浴30min

混匀，25℃室温静置10min后，5000g，25℃离心10min，取上清液测定540nm处的吸光值A。△A=A测定管-A对照管。每个测定管需设一个对照管。

GS活力单位的计算：

标准曲线：y = 0.8348x + 0.0008，R² = 0.9999

1、血清（浆）GS活性

单位定义：每ml血清（浆）在每ml反应体系中每小时产生1μmol γ-谷氨酰基异羟肟酸定义为一个酶活力单位。

计算公式：

GS（μmol/h/ml）=(ΔA-0.0008)÷0.8348×V反总÷V样÷T=10.268×ΔA

2、组织、细菌或细胞GS活性

（1）按样本蛋白浓度计算：

单位的定义：每mg组织蛋白在每ml反应体系中每小时产生1μmol γ-谷氨酰基异羟肟酸定义为一个酶活力单位。

GS（μmol/h/mg prot）=(ΔA-0.0008)÷0.8348×V反总÷(Cpr×V样)÷T

（2）按样本鲜重计算：

单位的定义：每g组织在每ml反应体系中每小时产生1μmol γ-谷氨酰基异羟肟酸定义为一个酶活力单位。

GS（μmol/h/g 鲜重）=(ΔA-0.0008)÷0.8348×V反总÷(W× V样÷V样总)÷T=10.268×ΔA÷W

 （3）按细菌或细胞密度计算

单位定义：每1万个细菌或细胞在每ml反应体系中每小时产生1μmol γ-谷氨酰基异羟肟酸定义为一个酶活力单位。

GS（μmol/h/10⁴ cell）=(ΔA-0.0008)÷0.8348×V反总÷(500×V样÷V样总)÷T

=0.021×ΔA

V反总：反应体系总体积，0.75ml； V样：加入样本体积，0.175ml；V样总：加入提取液体积，1 ml；T：反应时间，30 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/ml；W：样本质量，g；500：细菌或细胞总数，500万。