测定意义：

硝态氮是植物最主要的氮源。植物体内硝态氮含量反映了土壤中硝态氮的供应情况，可作为土壤氮肥的指标。测定植物体内的硝态氮含量，不仅能够反映出植物的氮素营养情况，而且对鉴定蔬菜和以植物为原料的加工制品的品质也有重要的意义。

测定原理：

在浓酸条件下，NO^3-与水杨酸反应，生成硝基水杨酸，硝基水杨酸在碱性条件下（PH>12）呈黄色，在一定范围内，其颜色深浅与含量成正比，可比色测定计算得硝态氮含量。

组成：

试剂一：粉剂×2支，4℃避光保存。临用前根据用量每瓶加1.2ml浓硫酸充分溶解。

自备仪器和用品：

蒸馏水、天平、常温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、恒温水浴锅。

样本处理：

按照质量（g）：蒸馏水体积(ml)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g，加入1ml蒸馏水）加入蒸馏水，室温匀浆后置于90℃恒温水浴锅中浸提30min，期间不断晃动或者置于90℃恒温摇床中振荡提取30min，待冷却后于25℃，12000g离心15min，取上清待测。（深色植物匀浆后加入约3mg试剂三后再提取）

测定操作表：

1、 分光光度计/酶标仪预热30min，调节波长至410nm，蒸馏水调零。

2、 在EP管中如下表加样

注意：空白管只需测定一次。

计算公式：

a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下

标准曲线：y=0.0156x+0.0073，R²=0.9997

NO₃^—— N含量（mg/kg鲜重）=（△A-0.0073）÷ 0.0156÷（W÷V样总）

                =64.1×（△A-0.0073）÷W

V样总：加入提取液体积，1ml，W：样本质量，g

b. 用96孔板测定的计算公式如下

标准曲线：y=0.0078x+0.0073，R²=0.9997

NO₃^—— N（mg/kg鲜重）=（△A-0.0073）÷ 0.0078÷（W÷V样总）

                =128.2×（△A-0.0073）÷W

V样总：加入提取液体积，1ml，W：样本质量，g

注意事项：

1. 试剂一配制好后尽快使用，4℃可保存一周。

2. 试剂一和试剂二均具有强腐蚀性，操作时需做好防护措施。

3. 最低检出限为2μg/g。