测定意义：

脂质过氧化是动植物体内活性氧(ROS)氧化生物膜的过程，脂质过氧化物（LPO）是脂质过氧化过程的产物，即ROS与生物膜的磷脂、酶和膜受体相关的多不饱和脂肪酸的侧链及核酸等大分子物质起脂质过氧化反应形成LPO，使细胞膜的流动性和通透性发生改变,最终导致细胞结构和功能的改变。因此，LPO常被作为机体氧化应激的一种指标，与某些疾病的病理过程，如肿瘤、化学中毒、感染、炎 症、自身免疫疾病、动脉粥样硬化（AS）及心脑血管疾病，以及衰老等生理过程密切相关。

测定原理：

LPO在酸性条件下加热，产生小分子终产物MDA，MDA与硫代巴比妥酸(thiobarbituric acid，TBA)缩合，生成红色产物，在535nm有最大吸收峰。

组成：

临用前注意试剂二是否完全溶解，如未溶解，可以70℃-90℃加热，并振荡以促进溶解。

自备仪器和用品：

酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、96孔板、研钵、冰和蒸馏水。

LPO提取：

1、细菌、细胞或组织样品的制备：

细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（10⁴个）：提取液体积（ml）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1ml提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

组织：按照组织质量（g）：提取液体积(ml)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1ml提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

2、血清（浆）样品：直接检测。

测定步骤：

1、酶标仪预热30min以上，调节波长到535 nm。

2、在EP管中依次加入如下试剂

立即混匀，95℃水浴40min后，流水冷却。3000g离心10min，吸取200µl上清加入96孔板，测定535nm下各管吸光值，记作A测定和A空白。ΔA=A测定-A空白。

LPO含量计算：

用96孔板测定的计算公式如下

y = 0.5723x - 0.0076，R² = 0.9997，x为标准品浓度μmol/ml，y为吸光度。

1、血清（浆）中LPO含量的计算：

LPO含量(nmol/ ml)=（ΔA+0.0076）÷0.5723×V标÷V样×1000

=1747.3×（ΔA+0.0076）

2、细菌、细胞或动物组织中LPO含量计算

（1）按照蛋白浓度计算

LPO含量(nmol/ mg prot)=（ΔA+0.0076）÷0.5723×V标÷(Cpr×V样)×1000

=1747.3×（ΔA+0.0076）÷Cpr

需要另外测定，建议使用本公司BCA蛋白质含量测定试剂盒。

（2）按照样品质量计算

LPO含量(nmol/g 鲜重)=（ΔA+0.0076）÷0.5723×V标÷(W ×V样÷V样总)×1000

=1747.3×（ΔA+0.0076）÷W

 (3 ) 按照细菌或细胞密度计算：

LPO含量(nmol/10⁴)=（ΔA+0.0076）÷0.5723×V标÷(500×V样÷V样总)×1000

=3.495×（ΔA+0.0076）

V标：标准曲线中加入标品体积，0.03ml；V样：加入样本体积，0.03 ml；V样总：加入提取液体积，1 ml；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/ml；W：样本质量，g；500：细胞或细菌总数，500万；1000，μmol到nmol换算系数。