1.产品信息

2.产品简介

PKMITO® 系列的Red、Orange 及Deep Red 具有非常低的化学毒性、光学毒性和优秀的线粒体定位能力，适用于活细胞线粒体成像。除此之外，此系列产品也已经在斑马鱼等小动物实验中用于线粒体成像。PKMO FX 在细胞经醛类固定液固定后依然有高的线粒体荧光保留，适用于固定细胞线粒体成像。综合这些优异的性能，PKMITO® 系列产品非常适合用于多种场景下的线粒体成像，尤其在SIM 和STED 等超分辨成像和细胞分选等领域。

3. 实验步骤

活细胞线粒体染料可参考以下步骤：

3.1 在PK Mito Red/ Orange/ Deep Red中加入100 μL（25 nmol）/20μL(5 nmol)新鲜干燥的 DMSO，混合均匀，得到250 μM母液。

3.2 将培养基预热至37 ℃，将PK Mito Red/ Orange/ Deep Red母液按照1000 - 5000倍稀释比例加入到预热的培养基中，稀释后的染液建议尽快使用，久置后可能导致部分染料分解或沉淀。

3.3 吸去细胞原有的培养基，更换为稀释好的培养基染液，在培养箱中孵育15分钟。

3.4 用预热的培养基清洗细胞一至两次，即可用于荧光成像。

注：我们建议对大多数细胞系和原代细胞使用200-300 nM，如HeLa、COS7、U-2OS、Vero细胞、原代神经元、脂肪细胞和肝细胞；对组织染色使用500-600 nM。

不同样品染色条件有所差异，建议起始染色方法为1000倍稀释，15分钟染色，请根据实际染色效果进行调整。

固定细胞线粒体染料可参考以下步骤：

3.5 在PK Mito Orange Fix 中加入100μL（50 次）/ 20 μL（10 次）新鲜干燥的DMSO，混合均匀，得到250 μM 母液。

3.6 将培养基预热至37 ℃，将PK Mito Orange Fix 母液500 倍稀释加入到预热的培养基中，得到500nM 的染色工作液，稀释后的染液建议尽快使用，久置后可能导致部分染料分解或沉淀。

3.7 吸去细胞原有的培养基，更换为稀释好的培养基染液，在培养箱中孵育20 分钟至90 分钟。

3.8 用预热的培养基清洗细胞一至两次，即可用于活细胞荧光成像。

3.9 用预热的PBS 缓冲液清洗细胞两次，加入预热的2.5%戊二醛或4%多聚甲醛等醛类固定液固定15 分钟。用PBS 缓冲液清洗细胞后，即可用于固定细胞成像。

注：我们建议对大多数细胞系和原代细胞使用500 nM 浓度染液作为起始点优化染色条件，如HeLa、COS7、原代神经元、心肌细胞等。

不同样品染色条件有所差异，建议起始染色方法为500 倍稀释，20 分钟染色，请根据实际染色效果进行调整。维拉帕米（Verapamil）可以在染色中加入，有助于得到更明亮均匀的染色线粒体。

4.染料光学性能