PfAgo核酸内切酶（PfAgo Endonuclease）来源于重组大肠杆菌，含有从激烈火球菌（Pyrococcus furiosus）中克隆的Argonaute（Ago）核酸酶基因，是一种依托引导序列（guide DNA）与靶核酸碱基互补配对，继而特异识别并剪切靶核酸的核酸内切酶。PfAgo 核酸内切酶在5′磷酸化的guide DNA（大于15 nt）引导下精准剪切单链DNA底物，剪切位点位于与引导序列互补的5′端开始的第10和第11个核苷酸之间，剪切不受靶标序列和剪切位点相邻序列限制。本产品于95℃ 1 小时，酶活性不损失。

包装量与储存条件：

JY0316包装量为JY0316-S和JY0316-L，各组分于-20℃及以下运输及保存，有效期为24 个月。长期保存建议放-80℃。

使用方法：

1、 自备以下仪器、试剂及耗材，辅助完成后续PfAgo Endonuclease切割反应。

①仪器：PCR 仪器（ABI7500、 QuantStudio 5、Stepone plus）、金属浴或水浴锅；

②试剂：40 mM Mn²⁺( Nuclease-free H₂O配制)、Nuclease-free H₂O；

③合成引物：guide DNA：5′ P-TTTGGAGCTGGTGGCG 3′；

ss DNA：5′-6-FAM-CCTACGCCACCAGCTCCAACTACCACAA-BHQ1 3′ ；

  ④耗材：Nuclease-free free EP 管。

2、按下表，配制反应体系，并混合均匀。

注：一般使用20 μL 体系，但也可以等比例放大；

      试验前用Nuclease-free H₂O将ssDNA 、guide DNA 稀释至相应浓度。

2、95℃孵育30 min。

3. 反应产物可直接进行核酸胶电泳分析。如果不立即电泳，可以加入EDTA 终止反应，并先冻存于-20℃。

图1.对照DNA的酶切结果                                                                                                         图2 酶活检测曲线图