miRNA 1st Strand cDNA Synthesis Kit (by stem-loop)
| 货号 | 22112 | 售价（元） | 600 |
| 规格 | 50 rxn | CAS号 |
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产品简介
miRNA 1st Strand cDNA Synthesis Kit（by stem-loop）是miRNA cDNA第一链合成的专用试剂盒(茎环法)。其中包含42℃, 2min的基因组DNA去除步骤，操作简便，可快速消除基因组DNA的干扰。本产品包含新一代逆转录酶ToLoScript III RTase以及针对miRNA的基因组去除与逆转录反应优化的最适缓冲液，从而有利于miRNA特异性逆转录产物的生成。建议使用ToloBio通用型2 × Q3 SYBR qPCR Master Mix (Universal，#22204)进行cDNA产物后续定量。
产品优势
✽ 优异的线性关系：在一定的模板区间内具有优异线性关系，模板含量最低检测限可低至pg级。
实验案例
以293T细胞的miRNA的10倍稀释梯度（1μg~10 pg）为模板，使用Tolobio#22112以及Supplier A，按照各自说明书推荐程序进行逆转录反应，得到的cDNA使用2 × Q3 SYBR qPCR Master Mix(Tolobio #22204)扩增hsa-miR-19a基因。实验结果显示，在一定的模板区间内，本产品相比于同类产品具有优异的线性关系。
实验流程
1.基因组DNA去除
组分
体积
5 × miR gDNA Erase-Out Mix
2 μL
Total RNA/miRNA
x μL(10 pg ~ 1 μg)
RNase-free ddH2O
Up to 10 μL
用移液器吹打混匀后短暂离心。
1.2 去除gDNA反应程序
温度
时间
42℃
2 min
2.第一链cDNA合成
2.1第一链cDNA合成反应体系
组分
体积
第1步的反应液
10 μL
Stem-loop Primer (2 µM)
1 μL
10 × miR RT Buffer (stem)
2 μL
ToLoScript III miR Enzyme Mix (stem)
1 μL
RNase-free ddH2O
Up to 20 μL
用移液器吹打混匀后短暂离心。
2.2第一链cDNA合成反应程序
温度
时间
25℃
5 min
50℃
15 min
85℃
2 min
逆转录产物可直接进行下游qPCR检测。若短期内不进行下游实验，可-20℃保存。若需长期保存，建议分装后保存于-80℃，避免反复冻融。
产品组成
组分
22112 (50 rxn)
● 5 × miR gDNA Erase-Out Mix
100 μL
● 10 × miR RT Buffer (stem) a
100 μL
● ToLoScript III miR Enzyme Mix (stem) b
50 μL
○ RNase-free ddH2O
1 mL
a.包含dNTP；
保存条件
-20℃保存，≤ 0℃运输；
✽ 最适的反应体系：含有针对新一代逆转录酶ToLoScript III RTase，以及miRNA的基因组去除与逆转录反应优化的最适缓冲液，更有利于miRNA特异性逆转录产物的生成。
1.1去除gDNA反应体系
室温融化5 × miR gDNA Erase-Out Mix、10 × miR RT Buffer (stem)及ToLoScript III miR Enzyme Mix (stem) 后置于冰上，在RNase-free离心管中配制如下反应体系：
b.包含ToLoScript III RTase, RNase inhibitor。