HOLMES ssRNA reporter (FAM)
| 货号 | 31111 | 售价（元） | 1000 |
| 规格 | 1 OD | CAS号 |
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产品简介
HOLMES ssRNA reporter (FAM)是单链RNA寡核苷酸探针，5′端标记FAM荧光报告基团（Reporter），3′端标记荧光淬灭基团(Quencher)。当HOLMES ssRNA reporter探针完整时，报告基团发射的荧光信号会被淬灭基团淬灭。而当HOLMES ssRNA reporter探针被切断后，5'端的FAM荧光报告基团和淬灭基团分离，从而发出可被检测的荧光信号。常见的Cas13酶在与guide RNA、target RNA组成三元复合物后，都会被激发出针对ssRNA的反式剪切活性(或称为旁路切割活性)，将HOLMES ssRNA reporter探针切碎，并发出荧光信号。
HOLMES ssRNA reporter (FAM)探针经过特别的序列优化，对Cas13反式切割活性高度敏感，可作为Cas13家族蛋白反式切割反应的报告探针，广泛用于CRISPR诊断反应体系以便对靶标核酸进行快速检测。
实验流程
1.反式剪切实验体系
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组分 |
体积 |
终浓度 |
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10 × HOLMES Buffer 1 |
2 μL |
1 × |
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10 µM Cas13 Nuclease |
0.05~0.5 μL |
25~250 nM |
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10 µM guide RNA |
0.05~0.5 μL |
25~250 nM |
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10 µM Target DNA |
0.05~0.5 μL |
25~250 nM |
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10 µM HOLMES ssDNA reporter |
0.05~0.5 μL |
25~250 nM |
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Nuclease-free water |
Up to 20 μL |
◆ 反式剪切体系中各组分的用量可以根据不同的实验目的进行调整，用量较少时可先将各组分稀释后加入体系；
◆ 建议使用低吸附的离心管、吸头等耗材；
◆ 反式剪切体系中探针的用量和预期反应到达平台期的时间可参考各批号Cas酶transU的具体数值，详见本公司提供的COA检测报告。
实时荧光定量PCR仪检测荧光信号，每30 sec采集一次荧光信号，反应温度根据不同的Cas13酶最适温度进行设定。
产品组分
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组分 |
31111 |
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1 OD |
HOLMES ssDNA reporter (FAM) a
a.HOLMES ssRNA reporter (FAM)总量为1 OD (约为8.45 nmol)，为干粉状态。使用前请先短暂离心，然后加入84.5 µL DNase/RNase-Free Water溶解，得到浓度为100 µM的贮存液，在无反复冻融的条件下可于-80℃避光保存6～12个月。使用前再将贮存液用DNase/RNase-Free Water稀释成10 µM的工作液，按下表推荐的浓度加入CRISPR剪切反应体系中。剩余工作液可于-20℃避光保存，3～6个月内使用。
保存条件
-80℃避光储存；≦4℃运输。