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产品简介

酶联免疫分析技术（ELISA）广泛用于抗原、半抗原或抗体的定量或定性分析，辣根过氧化物酶（HRP）及其偶联物是 ELISA 技术常用的一种酶，能催化底物如 3,3'5,5'-四甲基联苯胺（TMB）发生显色反应，从而进行定量或定性分析。由于 TMB 比其他显色底物具更高的灵敏度且无致癌性被广泛使用，TMB 主要用于 ELISA，免疫斑点杂交或免疫组化等实验，也有报道将其用于氯的检测分析。通常 TMB 显色试剂由多个组分构成，必须在使用前进行配制，并且容易产生沉淀，使用相对不便且容易导致检测结果不稳定。本品采用全新的 TMB 显色技术，将所有相关试剂全部配在一个溶液，即仅由单一溶液组成，不仅简化了操作步骤，而且使检测结果更加稳定可靠。

本品专门为 ELISA 实验而设计。检测原理在于 HRP 或其他适当过氧化物酶能催化生成可溶的蓝色产物，此时通常可在 370nm 测定吸光度。当显色反应被酸性溶液（如 0.5-2M H2SO4，0.5M HCl，1M H3PO4）终止后，产物由蓝色转为黄色，此时可在 450nm 测定吸光度。由于本品显色敏感度高，线性浓度范围较宽，极其适合用于定量 ELISA 分析。

本品用于 ELISA 检测，每个样品通常使用 0.1ml 显色液，则 100ml 本品约检测 1000 个样品，500ml 本品约检测 5000 个样品。

保存与运输方法

保存：2-8℃避光保存，2 年有效。

运输：冰袋运输。

注意事项

1） 本品含TMB和H2O2，对人体有刺激性，请注意防护。

2） 如发现本品出现浑浊或颜色变为蓝色，请停止使用。

3） 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法（ELISA）

1） 使用之前，取出适量单组份 TMB 显色液，使其回到室温再开始使用；

2） 参考 ELISA 检测试剂盒的实验步骤，当与 HRP 标记抗体孵育一段时间后，用适当洗涤液洗涤 3-5 次，每次 3-5min。

3） 洗涤完毕后，去除洗涤液，加入 100μl 单组份 TMB 显色液。

4） 室温避光孵育 5-30min 或更长时间（可长达 24h），直至显色到预期深浅。【注意】：建议根据实验需求选择最佳试剂用量、显色时间和反应温度。

5） 直接在 370nm 测定吸光度。或者加入 100μl 0.5-2M H2SO4 终止反应，随后在 450nm 测定吸光度。

常用问题

1. 背景显色太深

1）如果背景（没有样品的对照）显色太深，一方面需考虑使用适当的封闭液进行封闭，如商业化封闭液或者和一抗相同来源的血清（10%）进行封闭。另一方面，使用经过适当吸附的二抗，以减小二抗的非特异性吸附。

2）可以考虑缩短显色时间，或降低二抗浓度。另外，选择适当强度的洗涤液，或延长洗涤时间也会有所帮助。

2. 没有显色或显色太弱

1）适当提高一抗或二抗的浓度。检测二抗效果，滴一滴稀释二抗在离心管内，检测二抗是否被正常显色。

2）可以考虑使用更加灵敏的放大检测体系，例如生物素检测体系。

3）可以适当延长显色时间。

4）如果上述改进不能获得预期效果，可以考虑更换效果更好的一抗或 ELISA 试剂盒。