产品信息

产品简介

        由于磷酸化的化学计量比较低，因此磷酸肽的浓缩是成功进行磷酸蛋白质组学实验的关键步骤。
        PolyMAC 提供了一种有效的、大大改进的方法来实现更完整的磷酸肽的富集化。这种高度选择性 的富集法可以用于大多数复杂样品，因为它提供了最佳的专属性和回收率。 PolyMAC 是一种基于 聚合物的固定化金属离子亲和捕获法，具有卓越的磷酸化蛋白质组覆盖率和回收率。它是一种可  溶性纳米聚合物，设计用于与溶液中的磷肽相互作用，随后在固相载体上捕获，用于洗涤和磷肽  洗脱。与常用的二氧化钛和固定化金属离子亲和捕捉法相比， PolyMAC 具有更好的重现性和磷酸 化肽段的富集性，磷酸化肽段的选择性接近95%,回收率>90%。重要的是，对于总蛋白磷酸化水平较低的样品， PolyMAC 具有非常好的回收率和选择性。

产品组分及储存条件

操作步骤

1. 向酶解和脱盐后的干燥样品中加入200 μL 的 Loading Buffer 充分重悬样品。

2.将 PolyMAC   Beads 充分涡旋(10-20 s)后取50μL 于1.5 mL 的离心管中，瞬离2-3 s,然后去除上层储存液。

3.将重悬后的样品加入到含有 PolyMAC   Beads 的离心管中，然后置于混匀仪中，26℃,>1200   rpm, 剧烈摇晃25 min。

         4.将样品加入 PolyMAC-Tips  中，先20× g 离 心 2 min, 然后100× g 离 心 1min, 确保样品溶液从 Tips 尖端流出到离心管中。

        5.用200 μL Loading Buffer I 洗1次，先20g 离 心 2min, 然后100 g 离 心 1min, 弃滤液。 

        6.用200 μL Washing Buffer I 洗1次，先20g 离 心 2 min, 然后100g 离 心 1min, 弃滤液。 

       7.用200 μL Washing BufferII 洗1次，先20g 离 心 2 min, 然后100g 离 心 1min, 弃滤液。 

    8.将 Tips 放入新离心管中以收集洗脱的磷酸肽， Tips 中加入50 μL  Elution  Buffer,20g 离心2 min, 再加入50 μL Elution Buffer, 先 20g 离 心 2 min, 再以100 g 离心 1min, 收集滤液。

       9.如果有任何溶液残留在吸头中，请用移液器将其推出收集管中，冻干后-80 C 保存待质谱检测

案例展示

             图 1 .PolyMAC  与磷酸酪氨酸富集(A,C和E）或在PH值为8的RPLC分段进行总磷蛋白组识别（B,D和F）的性能

         我们描述了首次使用基于聚合物的金属离子亲和捕获器(PolyMAC) 在 HER2 驱动的乳腺癌转基因小鼠模型上分析组织磷酸化蛋白质组。

         通过将磷酸酪氨酸免疫沉淀与 PolyMAC 相结合，从5次 LC-MS/MS 运行中鉴定了411个具有139个磷酸酪氨酸、45个磷酸丝氨酸和29个磷酸苏氨酸位点的独特多肽。将反相高效液相色谱  在pH8.0 条件下与 PolyMAC 联用，从8个 LC-MS/MS 运行中鉴定了1571个独特的多肽，其中  1279个是磷酸丝氨酸，213个是磷酸苏氨酸，21个是磷酸酪氨酸。线性基序分析表明，许多亚磷 酸基序对应于众所周知的磷酸化基序。用药物基因相互作用数据库分析酪氨酸磷酸化蛋白质组发  现了一个潜在的治疗靶点网络，该网络以含有 FDA 批准的或处于临床开发中的抑制剂的 Src家族激酶为中心。这些结果表明， PolyMAC 非常适合于组织标本的磷酸化蛋白质组学分析。

注意事项及免责声明

本产品仅限于专业人员的科学研究使用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品。