产品介绍

Hoechst 33258，也称为bisBenzimide H 33258（双苯酰亚胺H33258），是一种通过荧光显微镜和流式细胞仪进行DNA检测的蓝色荧光探针。Hoechst 33258可用于活细胞或固定细胞，也适用于流式细胞术对细胞周期的分析和DNA浓缩的监测。虽然Hoechst 33258比其他衍生物（如Hoechst 33342）的细胞膜渗透性差些，但其能通过绘制发射光强度与DNA含量的标准曲线（a standard emission-to-content curve）来定量测量DNA含量。Hoechst 33258的最大激发波长是346nm，最大发射波长为460nm；与双链DNA结合后的最大激发波长为352nm，最大发射波长为461nm。

本品以粉末形式提供，溶于水，溶解度可达10mg/ml。用于细胞核染色，推荐工作浓度为0.5-10μg/ml。

   产品性质

1） CAS NO：23491-45-4

2） 英文同义名：4-[5-(4-Methyl-1-piperazinyl)[2,5′-bi-1H-benzimidazol]-2′-yl]-phenol.trihydrochloride;

bisBenzimide H 33258trihydrochloride; HOE 33258; BBIH; BXI-72;NSC33407;

3） 中文同义名：双苯酰亚胺H 33258三盐酸盐；赫斯特荧光染料33258；烟酸己可碱三盐酸盐；

甲嗪双苯咪酚三盐酸盐；

4） 分子式：C25H24N6O · 3HCl

5） 分子量：533.88

6） 纯度：≥95%

7） 外观：黄色至深黄色粉末

8） 溶解性：溶于水（10 mg/ml）

9） Ex/Em：346/460 nm；352/461 nm（Hoechst 33258-DNA）；

保存与运输方法

保存：-20°C避光干燥保存，3年有效。

运输：冰袋运输。

储存液配制

用双蒸水溶解，溶解度高达10mg/ml，根据实际情况配制所需浓度的储存液如5mg/ml。储存液2-8ºC避光保存，至少1个月有效。【注意】：本品用磷酸盐缓冲液溶解会出现沉淀。

使用方法

1. 工作液配制

用双蒸水或PBS稀释母液，配制成所需要的工作浓度（0.5-10μg/ml）。

2. 固定的细胞或组织染色

对于固定的细胞或组织样品，固定后，适当洗涤去除固定剂。Hoechst 33258染色通常在其他染色的最后进行。如果不需要进行其它染色，则直接进行Hoechst 33258染色。

2.1 对于贴壁细胞或组织切片：加入适量Hoechst 33258染色液，覆盖住样品即可。

对于悬浮细胞：至少加入待测染色样品体积3倍的染色液，混匀。室温放置3-5min。

2.2 吸除Hoechst 33258染色液，用TBST、PBS或生理盐水洗涤2-3次，每次3-5min。

2.3 直接在荧光显微镜下观察或封片后荧光显微镜下观察。Ex/Em=352/461nm。

3. 活的细胞或组织染色

3.1 细胞培养物中加入适量Hoechst 33258染色液，约1/10细胞培养基体积，必须充分覆盖住待染色的样品。对于六孔板，一个孔通常需加入1ml染色液；对于96孔板，一个孔通常需加入100μl染色液。

3.2 在37℃培养细胞10～20min。

3.3 用PBS或合适的缓冲液洗细胞两次。

3.4 直接在荧光显微镜下观察或封片后荧光显微镜下观察。Ex/Em=352/461nm。

注意事项

1）Hoechst 33258对人体有一定刺激性，请注意适当防护。

2）荧光染料都存在淬灭的问题，建议染色后尽量当天完成检测。

3）为减缓荧光淬灭可以使用抗荧光淬灭封片液（Fluoromount-GTM抗荧光淬灭封片剂（水溶性））。

4）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

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