1.产品信息

2.产品简介

PK Mito FIX 系列是新一代兼具高细胞渗透性与强固定滞留能力的线粒体内膜荧光探针，本染料需在活细胞状态下染色，细胞染色后经戊二醛固定液固定后依然有高的线粒体荧光保留，适用于活细胞以及固定细胞的线粒体成像。PK Mito FIX 系列染料具有良好的细胞渗透性，对 HeLa 细胞可在 10 分钟内完成高效线粒体标记；且可与戊二醛发生高效共价交联，固定后信号保留高达 90%以上。

PK Mito FIX 系列染料适配多类成像平台，完美兼容共聚焦、STED、SIM 等高分辨成像、免疫荧光多色联用、自标记标签系统（Halo-tag、TMP-tag 等），且耐受膨胀显微镜（ExM）中凝胶聚合、变性处理等流程，染色信号在膨胀之后依然稳定保留，实现普通共聚焦显微镜就能够分辨线粒体嵴的超微结构，降低线粒体超微结构研究门槛。。

3. 溶解和储存建议

收到干粉产品后，应将其保存在-20℃或以下。探针干粉在室温避光条件下可稳定保存超过一周，在-20℃下可稳定保存超过 12 个月。建议使用新开封的无水 DMSO 来制备 1000 倍母液。在与空气和水分接触时，DMSO 会产生降解产物，这极有可能会缩短探针溶液的保存期限，即便在-20℃条件下也是如此。使用后，应将探针的母液保存在-20℃以下，母液不建议分装。每次打开产品前，应让其先恢复至室温。在正确溶解和储存的情况下，染料母液可以稳定保存至少 3 个月。

如需长期储存，建议产品开封后使用 DMF 或者任意比例的乙腈水溶液溶解产品后分装，再经过真空干燥、冻干或者氮气吹干后可长期保存。

4. 实验步骤

4.1 在 PK Mito FIX 干粉产品中加入 20 μL（20 次规格）/100 μL（100 次规格）新鲜干燥的细胞级别 DMSO 或 DMF 溶剂，充分混合均匀，得到 250 μM 母液（请按照产品规格调整溶剂加入量）。

4.2 将培养基预热至 37 ℃，将 PK Mito FIX 染料母液按照 1000 倍稀释比例加入到预热的培养基中，稀释后的染液应尽快使用，久置后可能导致部分染料分解。

4.3 吸去细胞原有的培养基，更换为稀释好的培养基染液，在培养箱中孵育 15 分钟后用预热的 PBS 缓冲液清洗细胞一至两次即可用于活细胞荧光成像。

注：建议对大多数细胞系和原代细胞使用 250 nM 作为起始点优化染色条件，如 HeLa、COS-7、U-2OS、原代神经元、心肌细胞等；对离体组织染色使用 500-1000 nM 作为起始点优化染色条件。不同样品染色条件和最终效果有所差异，建议起始染色方法为 1000 倍稀释，15 分钟染色，可以在不同样本上测试不同的染料浓度，以达到更好的信背比效果。

4.4 活细胞染色后，如需细胞固定，可用 PBS 缓冲液清洗细胞后加入预热好的 2.5%戊二醛固定液，室温固定 15 分钟，即可用于固定细胞的荧光成像。在只使用甲醛的固定条件下，PK Mito FIX 系列染料固定后荧光保留欠佳，如必需使用甲醛固定时可尝试使用甲醛-戊二醛混合固定液。