产品简介

本试剂盒基于高斯荧光素酶 (Gluc)分泌型报告基因系统开发。Gluc 可自主分泌至细胞培养液上清或实验动物外周血，无需破碎细胞，且支持动物活体连续、动态、无创、多次取样检测。广泛应用于启动子活性分析、信号通路研究、基因表达调控、药物筛选及细胞分泌功能机制研究等场景。

产品组成

存储及有效期

冰袋运输，-20℃避光保存，有效期 1 年。

使用方法

1. 从冰箱取出 Gluc Assay Buffer (Glow-type)或 Gluc Assay Buffer (Flash-type) 置于室温融化，并上下颠倒 3-5 次混匀备用。

【注意】：本试剂盒提供两种用于 Gluc 分析的缓冲液。Gluc Assay Buffer (Glow-type) 含有稳定剂，弥补了 Gluc 信号快速衰退的缺点，可用于稳定活性分析；而 Gluc Assay Buffer (Flash-type) 则适用于检测低表达量的 Gluc 活性，可以提供更高的灵敏度。Flash-type 缓冲液中 Gluc 的活性比 Glow-type 缓冲液中高数倍，但是 Glow-type 缓冲液中的 Gluc 的活性更稳定。实验开始 10 分钟内近 90%的信号可被捕获，但在同一时间内，Flash-type 缓冲液中 Gluc 的活性已降至不到40%。因此，我们建议先使用 Gluc Assay Buffer (Glow-type) 缓冲液检测 GLuc 的活性，特别是高通量筛选。如果 GLuc的活性太低，则可以考虑使用 Gluc Assay Buffer (Flash-type) 缓冲液。

2. 从冰箱取出 Gluc Substrate (100x)，每次开盖前需进行短暂涡旋、低速离心。

3. Gluc 检测工作液的配制：例如，10 个样品, 检测每个样品需要 100μL 工作液。即吸取 10μL 的 Gluc Substrate (100x) 加入到 1mL 的 Gluc Assay Buffer 缓冲液中，并充分混匀。

【注意】：①建议现配现用，剩余 Gluc 检测工作液在当次实验结束后直接舍弃，不要留存。

②Gluc Substrate (100x) 配制在无水乙醇中。由于无水乙醇 容易挥发，有时会在初次使用时发现体积明显小于包装规格的情况，此时用无水乙醇把体积补足至包装规格，并混匀后即可使用。

4. 细胞已转染Gluc报告基因质粒或实验动物体内已被Gluc报告基因质粒或AAV病毒侵染。收集0.1-0.2mL待测细胞培养上清液或动物血清装到 1.5mL 离心管里，恢复至室温。

5. 用移液器吸取 5~20μL 待测样品（设置 2-3 复孔/样）分别加到 96 孔白色（不透光）或黑色的微孔板。

6. 用多道移液器按照 100 μL/孔向待测样本孔内加入预先配好的 Gluc 检测工作液。根据仪器说明书设置测试条件，一般设定酶标仪震荡后检测，检测时间为 1-3 秒。

【注意】！！

①如果使用的是 Gluc Assay Buffer (Glow-type) 缓冲液，在加入 Gluc 检测工作液后，需要室温孵育 5-10 分钟，待信号稳定再进行读板检测！

②如果使用的是 Gluc Assay Buffer (Flash-type)缓冲液，加入 Gluc 检测工作液后，需在 2 分钟内立即进行读板检测，从而减少信号衰减！ 也可以选用配备自动进样器的酶标仪，降低孔间差异，特别适合检测闪光型发光。

7. 记录并导出数据。

【关于发光信号】：

1) 发光信号受培养基条件、动物个体差异，给药类型等实验条件的影响。使用不同的酶标仪测的 RLU 的数值可能有所不同。

2) 当设定多个时间采样点时，样品应保存于-20℃或-80℃，荧光素酶的活性在一个月内相对稳定。

3) 如果 Gluc 发光信号（RLU）超出酶标仪检测限，则需要稀释样品，保证 Gluc 数据可读性。