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产品描述

D-Luciferin（D 荧光素）：有三种，分别是 D-Luciferin, Sodium Salt/D 荧光素钠盐、D-Luciferin, Potassium Salt/D-荧光素钾盐和 D-Luciferin Firefly,free acid/D-萤火虫荧光素

我公司提供几种常用类型的 D-Luciferin，每批试剂都经过严格的质量验证（经 9 次独立的 HPLC 和 FTIR 标准法监测）和发光效率检测，确保客户每次试验的高重复性和成功性。所有产品都可用于体内成像分析和体外化学发光检测实验。D-Luciferin 是合成的萤火虫荧光素，结构与 promega 公司提供的甲虫荧光素一致，是水溶性的萤火虫荧光素酶底物。

荧光素（Luciferin）是常见生物性发光报告基因荧光素酶（luciferase）在体内成像的底物。作用原理是荧光素酶在Mg2+和O2参与下催化荧光素氧化成oxyluciferin,在荧光素的氧化过程中，发出生物荧光(bioluminomescence)。然后通过化学发光仪或液闪测定仪测定生物荧光。目前市场上有三种产品形式，D-荧光素（游离酸），D-荧光素钠盐，以及D-荧光素钾盐。这三种产品主要的差别在于溶解特性上。D-荧光素（游离酸）水溶性以及缓冲体系的溶解性都很弱，除非溶于弱碱如NaOH和KOH溶液。溶于甲醇（10 mg/ml）和DMSO（50 mg/ml）。但钠盐和钾盐形式的D-荧光素能够非常容易且快速的溶入水或者缓冲液中，使用方便，溶剂无毒性，特别适合体内实验。配成液体后的这三种产品，在绝大多数的应用上都没有实质性的差别。

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应用：1）活细胞、组织或生物体内 luc 标记基因和荧光素酶-融合基因体内/体外表达的成像分析；

2）广泛用于报告基因分析，免疫分析和 ATP 荧光卫生监测分析；

使用方法：

1．体外生物发光检测

1）1g的D-Luciferin Firefly, free acid溶解入33.3ml的无菌水中，配制成30mg/ml的储存液（200×）。混匀后用0.2µm滤膜过滤，然后立即使用或分装于-80℃避光保存，避免反复冻融，冻存的储存液可保存1年。

注：D-Luciferin Firefly, free acid储存液也可用弱碱（如 NaOH，KOH溶液）或DMSO溶解，用碱性pH溶液去溶解本品，如果有沉淀发生则需要调整pH至更高直至完全溶解。之后可以重新用酸性溶液来中和，调整至所需的pH环境。

2）用完全培养基将储存液按 1:200稀释（储存液：完全培养基1:200），配制成工作液（终浓度150µg/ml）。

3） 成像前，去除培Luciferase表达细胞中的培养基，加入1×荧光素工作液37℃孵育5min, 然后进行图像分析。

4）工作液应在使用后丢弃。

2．体内活体成像检测

1）1g的D-Luciferin Firefly, free acid用66.6ml的DPBS(, w/o Mg2+ 和Ca2+)配制 D-荧光素工作液（15mg/ml），0.2µm 滤膜过滤除菌。混匀后立即使用或分装于-80℃避光保存，避免反复冻融。一旦使用，放到 4℃解冻，保持冰冷且避光，冻存的储存液可保存1年。

注：D-Luciferin Firefly, free acid储存液也可用弱碱或DMSO（w/o Mg2+）配置。

2）  每只老鼠的注射量取决于老鼠的体重：150mg/Kg。

3） 注射入体内 10-15min后，进行成像分析。

注：建议对每只动物模型都需要建立荧光素酶动力学曲线，从而确定最高信号检测时间和信号平台期。

注意事项：

1） 本品保存和操作的过程中都要避光。另外储存液过滤除菌后，-80℃分装保存，避免反复冻融。如果有条件，对储存液充氮气或氩气（防止氧化），稳定性和保存时间更长，长达1年。

2） 注射方式，动物类型以及体重等都会影响信号的发射，因此建议每次实验都要做荧光素酶动力学曲线，确定最佳信号平台期和最佳的检测时间。