吐露港（ToloBio）生物科技有限公司首次发现 CRISPR-Cas12蛋白具备高效的“反式切割活性”，并基于该酶的独特优势研发了“福尔摩斯/HOLMES”核酸快速检测平台技术（one-Hour Low-cost Multipurpose highly Efficient System）。相比于传统的分子诊断技术，基于CRISPR的HOLMES技术具备高灵敏、高特异、快速便捷等优势，被《Science》杂志誉为“下一代分子诊断技术”，在病原菌检测、遗传疾病筛查、精准医疗等众多领域有很大的应用潜力。
Cas12a
HOLMES检测平台[1]
· Cas12a家族是一类由单个crRNA介导的核酸内切酶
· 在HOLMES核酸检测系统中，Cas12a: crRNA: 靶标DNA分子三元复合物的形成会激活Cas12a的反式剪切活性，可无差别的剪切反应体系中的ssDNA分子，包括荧光标记的ssDNA探针，从而产生大量的荧光信号，指示检测结果为阳性
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产品名称 |
规格 |
货号 |
应用 |
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LbCas12a(Cpf1) Nuclease |
100 pmol |
32108-01 |
不仅可用于体外dsDNA的特异剪切，也可用于靶标核酸的快速检测，详见HOLMES核酸快检技术[1] |
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1000 pmol |
32108-03 |
Cas12b
HOLMESv2检测平台[2]: 率先实现“一管法”和“绝对定量”
· 采用嗜热菌来源的Cas12b，比Cas12a更加耐热，使核酸扩增与靶标检测在同一管中进行
· Cas12b: crRNA: 靶标DNA三元复合物会激活Cas12b的反式剪切活性, 可无差别剪切反应中的ssDNA分子，包括荧光标记的ssDNA探针，从而产生大量的荧光信号，指示检测结果为阳性
· “一管法”体系既能保持对SNP和甲基化位点的分辨能力，又有效地避免气溶胶污染的风险，同时缩短检测耗时
· 通过结合HOLMESv2与digital PCR体系，可实现对靶标核酸的绝对定量
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产品名称 |
规格 |
货号 |
应用 |
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AapCas12b(C2c1) Nuclease |
100 pmol |
32118-01 |
最佳反应温度为60℃，可与LAMP恒温扩增联用，实现一步法CRISPR检测体系，详见HOLMESv2核酸快检技术[2] |
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1000 pmol |
32118-03 |
Cas13a
ToloBio拥有Cas12核酸检测的方法学专利，并在2020年与美国科学院院士张锋教授领衔创立的Sherlock Biosciences就Cas12和Cas13诊断技术达成了中美市场的“专利交叉授权”合作。2022年11月，双方又进一步签署了全球范围内的CRISPR诊断“专利交叉授权”合作协议，完成了ToloBio在CRISPR检测领域方法学专利的全面布局。
HOLMES与SHERLOCK“双剑合璧”[3]
· Cas13家族是一类由crRNA单独介导的核酸内切酶，可特异地识别并剪切靶标ssRNA
· Cas13与crRNA、靶标RNA形成三元复合物后，激活针对非特异序列ssRNA的“反式剪切活性”，将体系中的ssRNA切碎
· 靶标RNA浓度越高，体系反式剪切ssRNA报告探针的速度更快，释放荧光信号到达平台期的时间越短
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产品名称 |
规格 |
货号 |
应用 |
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LwaCas13a(C2c2) Nuclease |
100 pmol |
32117-01 |
反式剪切RNA报告探针，可用于开发靶标核酸的快速检测试剂盒 |
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1000 pmol |
32117-03 |
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货号 |
产品 |
规格 |
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JY0209 |
双靶标HybriDetect侧向层析试纸条（彩虹型） |
50T |
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JY0307 |
Tiosbio® CRISPR单酶切及扩增产物检测试纸条 |
50T |
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JY0301 |
CRISPR Cas12/13 HybriDetect试纸条 |
50T |
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JY0308 |
Tiosbio® CRISPR双酶切检测试纸条（变色龙） |
50T |
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WLB8201KIT |
DNA恒温快速扩增试剂盒（基础型） |
48T |
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WLE8202KIT |
DNA恒温快速扩增试剂盒（荧光型） |
48T |
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WLN8203KIT |
DNA恒温快速扩增试剂盒（胶体金试纸条型） |
48T |
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WLRB8204KIT |
RNA恒温快速扩增试剂盒（基础型） |
48T |
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WLRE8205KIT |
RNA恒温快速扩增试剂盒（荧光型） |
48T |
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WLRN8206KIT |
RNA恒温快速扩增试剂盒（胶体金试纸条型） |
48T |
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WLB5001 |
DNA恒温快速扩增试剂盒（液体基础型） |
100T |
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WLN5002 |
DNA恒温快速扩增试剂盒（液体胶体金型） |
100T |
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WLR5003 |
DNA恒温快速扩增试剂盒（液体荧光型） |
100T |
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WLRB5001 |
RNA恒温快速扩增试剂盒（液体基础型） |
100T |
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WLRN5002 |
RNA恒温快速扩增试剂盒（液体胶体金型） |
100T |
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WLRE5003 |
RNA恒温快速扩增试剂盒（液体荧光型） |
100T |
Cas12f
不同靶ssDNA存在时，Cas12f1行使高效反式剪切活性的荧光信号结果
· Cas12f核酸酶是依赖sgRNA介导的内切核酸酶，倾向于特异结合并剪切靶标ssDNA，且无需PAM位点
· Cas12f蛋白分子量普遍较小（约61.5kD），这是其主要优势之一
· 与Cas12a/b功能类似，已有文献报道，Cas12f对ssDNA靶标中SNP位点的分辨能力高于Cas12[4]。
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产品名称 |
规格 |
货号 |
应用 |
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Un1Cas12f1(Cas14a1) Nuclease |
100 pmol |
32119-01 |
与Cas12a/b功能类似，Cas12f也可用于靶标核酸的快速检测 |
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1000 pmol |
32119-03 |
CRISPR-Dx的优势
· 多重：联检/降本；微流控/盘式芯片；色码CARMEN；体系多重
· 绝对定量：液相微球/固态微孔
· 超灵敏/特异：1-2个拷贝可测；识别PCR灰区、SNP位点、甲基化位点
· 超快速：1-5min内完成剪切；恒温扩增；One-Step；免扩增；免提取核酸
· POCT/全自动：LFA；LDT；全流程自动化；便捷/成本低
其他CRISPR-Dx产品
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产品名称 |
货号 |
规格 |
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AsCas12a(Cpf1) |
32104-01 |
100 pmol |
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32104-03 |
1000 pmol |
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AacCas12b(C2c1) |
32116-01 |
100 pmol |
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32116-03 |
1000 pmol |
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FnCas12a(Cpf1) |
32106-01 |
100 pmol |
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32106-03 |
1000 pmol |
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Lb5Cas12a(Cpf1) |
32110-01 |
100 pmol |
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32110-03 |
1000 pmol |
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SpCas9 |
32101-01 |
100 pmol |
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32101-03 |
1000 pmol |
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Sp-dCas9 |
32102-01 |
100 pmol |
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32102-03 |
1000 pmol |
Cas Protein表达质粒
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产品名称 |
货号 |
规格 |
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pET28TEV-AsCas12a |
92104 |
1 ug (20uL, 50 ng/uL) |
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pET28TEV-AsCas12a-NLS |
92105 |
1 ug (20uL, 50 ng/uL) |
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pET28TEV-FnCas12a |
92106 |
1 ug (20uL, 50 ng/uL) |
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pET28TEV-FnCas12a-NLS |
92107 |
1 ug (20uL, 50 ng/uL) |
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pET28TEV-LbCas12a |
92108 |
1 ug (20uL, 50 ng/uL) |
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pET28TEV-LbCas12a-NLS |
92109 |
1 ug (20uL, 50 ng/uL) |
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pET28TEV-Lb5Cas12a |
92110 |
1 ug (20uL, 50 ng/uL) |
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pET28TEV-BbCas12a |
92111 |
1 ug (20uL, 50 ng/uL) |
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pET28TEV-BoCas12a |
92112 |
1 ug (20uL, 50 ng/uL) |
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pET28TEV-HkCas12a |
92113 |
1 ug (20uL, 50 ng/uL) |
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pET28TEV-OsCas12a |
92114 |
1 ug (20uL, 50 ng/uL) |
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pET28TEV-TsCas12a |
92115 |
1 ug (20uL, 50 ng/uL) |
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pET28TEV-AacCas12b |
92116 |
1 ug (20uL, 50 ng/uL) |
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pET28TEV-LwaCas13a |
92117 |
1 ug (20uL, 50 ng/uL) |
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pET28TEV-AapCas12b |
92118 |
1 ug (20uL, 50 ng/uL) |
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pET28TEV-Un1Cas12f1 (Cas14a1) |
92119 |
1 ug (20uL, 50 ng/uL) |
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pET28TEV-Lb4Cas12a |
92120 |
1 ug (20uL, 50 ng/uL) |
CRSIPR体系反式剪切报告探针
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品名 |
货号 |
规格 |
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HOLMES ssDNA reporter (FAM) |
31101 |
10 nmol powder |
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HOLMES ssRNA reporter (FAM) |
31111 |
10 nmol powder |
Reference:
[1] Li S, Cheng Q, Wang J, et al. CRISPR-Cas12a-assisted nucleic acid detection[J]. Cell Discovery. 2018, 4: 20.
[2] Li L, Li S, Wu N, et al. HOLMESv2: A CRISPR-Cas12b-Assisted Platform for Nucleic Acid Detection and DNA Methylation Quantitation[J]. ACS Synthetic Biology. 2019, 8(10): 2228-2237.
[3] Gootenberg JS, Abudayyeh OO, Lee JW, et al. Nucleic acid detection with CRISPR-Cas13a/C2c2. Science. 2017;356(6336):438-442.
[4] Harrington LB, Burstein D, Chen JS, et al. Programmed DNA destruction by miniature CRISPR-Cas14 enzymes. Science. 2018;362(6416):839-842.