产品简介：

Dispase中文名称为中性蛋白酶，也称为分散酶，是一种非特异性的金属蛋白酶，被用来从各种不同组织或器官中消化细胞外基质，释放并制备原代单细胞；或用于细胞培养中的细胞收获或接种转移；也被用于防止悬浮细胞培养时的细胞意外结团。蛋白水解酶类，如胰蛋白酶、胶原酶和链酶蛋白酶都被用语来分散组织、分类细胞，但他们常伤害细胞，并且在培养时不稳定，甚至可能引入支原体污染。Dispase就没有这个问题，不会给细胞膜带来伤害，而且因为其来自细菌，故不会引入支原体或任何动物病毒；温度、pH、血清成分等的差异对Dispase影响很小。Dispase经稀释后其活性就大大降低，这也方便了后续的培养。Dispase甚至被加入细胞培养悬液中用于防止细胞团结。该酶具有以下优势：1）一种快速有效且温和的细胞消化酶，对细胞损伤小，且能维持细胞膜完整性；2）来源于细菌，无支原体或其他动物病毒污染；3）稳定性强，不受温度、pH及血清组分的影响；4）可用于多种类型组织和细胞的分离等。本品非无菌Dispase II，来源于Bacillus polymyxa，使用时需对其除菌处理，用于细胞培养时常用工作浓度为0.6-2.4Uml。

产品性质

比活性（Specific Activity）：≥0.8Umg (+37°C, casein as substrate, pH 7.5)

单位定义（Unit Definition）：在温度37℃、pH值为7.5的条件下，每分钟水解酪蛋白释放出相当于1µM(181µg)酪氨酸的福林阳性氨基酸和肽所需要的酶量，即为一个蛋白酶活性单位，以U表示。

最佳pH（pH Optimum）：6.0-8.5

抑制剂（Inhibitors）：EDTA, EGTA, Hg2+, 其他金属离子。血清不会抑制dispase活性。

激活剂（Activator）：Ca2+，Mg2+，Mn2+，Fe2+，Fe3+，Al3+。最佳的Ca2+浓度为2mM。本酶制品已含足量的Ca2+使其处于最佳活性。

母液及工作液配制

1.用Hepe缓冲盐溶液（50mM HepesKOH pH7.4, 150mM NaCl）溶解适量本品冻干粉，配制成10mgml的储存液，用0.22µM滤膜过滤除菌。

2.使用时用适当细胞培养液将上述储存液稀释到工作液浓度即可，用于细胞分离时其常用工作浓度为0.6-2.4Uml。【注】：不推荐使用高于2.4Uml的工作浓度。

使用方法

A.组织的解离

1）用无菌的小刀或者剪刀将组织剪成合适大小的组织块；

2）用无菌PBS清洗组织块；

3）向上述组织块中加入Dispase II溶液（工作浓度为0.6-2.4Uml），并确保组织块全部浸没于Dispase 溶液中。

4）37℃孵育，孵育过程缓慢搅拌直至组织块全部解离。【注】：若第一次使用该酶，可通过细胞计数来确定需要的总孵育时间。一般对于较难解离组织，1h即可达到分离目的，但更长时间（如数小时）的孵育也不会明显影响细胞活性。

5）如有需要，可将上述消化产物通过无菌不锈钢网筛过滤，以分开单细胞与残留的组织块。或者待大块组织沉淀后轻轻倒出上层细胞，若是需要，换用新鲜dispase溶液以进一步解离残留组织。

6）离心沉淀细胞，倒掉酶溶液；

7）用培养基重悬细胞沉淀，并于常规条件下培养细胞。

B. 细胞传代

1）利用Dispase 溶液（37℃预热）浸没细胞，于37℃孵育5min；

2）吸除上述溶液，继续于37℃孵育10min；

3）显微镜下观察细胞分离情况，如需要，可进一步孵育15min；

4）利用细胞培养基悬浮细胞，轻轻旋转使得细胞沉淀并用培养基清洗细胞；

5）换用新鲜细胞培养液重悬细胞，并按常规方法进行细胞铺板。

运输和保存方法

冰袋运输。

冻干粉4℃保存。储存液于4℃可稳定保存2周，若长期保存，请分装后于-20℃冻存。避免反复冻融。

注意事项

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

Dispase 是Godo shuseiCo,Ltd的注册商标。