产品简介：

胶原酶（Collagenase，CAS NO. 9001-12-1）是一种蛋白水解酶，常用来消化细胞外基质蛋白。作为一种肽链内切酶，胶原酶特异性识别Pro-X-Gly-Pro序列（高频出现在胶原collagen，很少在其他蛋白中发现）并切割氨基酸（X）和甘氨酸（Gly）之间的肽键。不同于其他蛋白酶，胶原酶是唯一一种可识别并降解具三股超螺旋结构的天然胶原纤维，这种胶原纤维广泛存在结缔组织。

商业化胶原酶来源于溶组织梭菌（Clostridium histolyticum），是一种酶粗提物，不仅含有梭菌蛋白酶A（Clostridiopeptidase A），能够降解天然胶原和网状纤维；还含有其他的一些蛋白酶、多糖酶、脂酶等，分别用以水解存在结蹄组织和上皮组织细胞外基质内的其他蛋白、多糖和脂质等。目前商业化的胶原酶因所含组分的差异分为五类，其在应用上具有一定区分，详见附录1。

本品是V型胶原酶，活性≥450 units/mg冻干物，部分纯化型，含更高的胶原酶和酪蛋白活性，更低胰酶水平以降低对膜蛋白和受体造成损伤。适用于胰岛制备。

产品性质：

1）EC NO：3.4.24.3

2）CAS NO：9001-12-1

3）同义名：Clostridiopeptidase A梭状杆菌肽酶A，梭菌肽酶A

4）酶活力单位定义：在37℃，pH7.4，Ca2+的条件下，5h内水解牛跟腱胶原产生多肽量相当于1µmol亮氨酸茚三酮颜色变化时所需的酶量定义为1个胶原消化单位（collagen digestion unit，CDU）。

保存与运输方法

保存：2-8℃干燥保存，可置于-20℃长期保存，2年有效。

运输：冰袋运输。

使用方法

一、储存液制备

1）直接往100mg胶原酶内加入100µl含钙镁的HBSS缓冲液，轻轻漩涡震荡确保完全溶解混匀。

2）根据具体批次的酶活力，用含钙镁的HBSS缓冲液调整酶浓度到100U/µl（1000×储存液），之后用低蛋白吸附滤膜过滤除菌。

3）立即使用或将储存液根据单次用量分装，置于-20℃避光保存。

4）使用前置于冰上融化，避免反复冻融。建议胶原酶的工作浓度范围50-200U/ml（或0.5-2.5mg/ml），具体使用浓度请根据具体消化对象或参考文献来调整。

二、组织分离

1）用无菌手术刀或剪刀将组织切成3-4mm小片，之后用含钙镁的HBSS缓冲液清洗组织片几次；

2）加足量含钙镁的HBSS缓冲液浸没组织片，之后按照50-200U/ml用量加入适量胶原酶；

3）37℃孵育4-18h，置于水平摇床并且孵育体系加入3mM CaCl2可提高消化效率。

4）将消化好的细胞混合物用无菌的不锈钢或尼龙网过筛。残留组织可再添加适量的新鲜胶原酶工作液于37℃孵育以进一步解离。

5）将过筛收集到的细胞用不含胶原酶的HBSS缓冲液清洗几遍。

6）低速离心，吸掉清洗液。最后用适当的细胞培养液重悬细胞，使用自动细胞计数器或手动法进行活细胞数检测。

三、器官灌注

1）将胶原酶加入37℃预热含钙镁的HBSS缓冲液，使其浓度为50-200U/ml，或根据具体实验体系调整；另加入3mM CaCl2可提高消化效率。

2）按照针对特定器官的预优化频率来进行灌注；

3）将收集到的细胞/组织混合碎片用无菌的不锈钢或尼龙网过筛。残留组织可再添加适量的新鲜胶原酶工作液于37℃孵育以进一步解离。

4）将过筛收集到的细胞用不含胶原酶的HBSS缓冲液清洗几遍。

5）低速离心，吸掉清洗液。最后用适当的细胞培养液重悬细胞，使用自动细胞计数器或手动法进行活细胞数检测。

注意事项

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

表1：