LwaCas13a (C2c2) CRISPR酶
| 货号 | 32117-01/32117-03 | 售价 | 1300/5500 |
| 规格 | 100 pmoL/1000 pmoL | CAS号 |
- 产品简介
- 相关产品
产品信息
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货号 |
产品名称 |
规格 |
价格 |
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32117-01 |
LwaCas13a (C2c2) |
100 pmoL |
1300 |
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32117-03 |
LwaCas13a (C2c2) |
1,000 pmoL |
5500 |
产品简介
LwaCas13a 核酸酶(又名 C2c2)是依赖于 crRNA 介导的 RNA 内切核酸酶，来源于 Leptotrichia wadei 菌株。在靶标单链 RNA 存在 PFS 序列的情况下，可特异地识别并剪切靶标 RNA。此外，Cas13a 也具有反式剪切活性(即旁路剪切活性/附属剪切活性)，即当 LwaCas13a 蛋白与 crRNA、靶标 RNA 结合形成三元复合物后，便会被激活针对非特异序列单链 RNA 的反式剪切活性，将体系中的任意序列单链 RNA 切碎。该活性也被用于靶标核酸的快速检测试剂盒的开发。例如，Broad 研究所的张锋团队便利用 Cas13a 蛋白开发了名为“SHERLOCK”的下一代分子诊断系统(详细信息请参考 PMID: 28408723)
产品组分
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组分 |
32117-01(100 pmol) |
32117-03(1000 pmol) |
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LwaCas13a Nuclease (10 μM)a |
100 pmol |
1000 pmol |
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10 × HOLMES Buffer 2 |
1 mL |
1 mL |
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Control Target RNA and crRNA (10 μM)b |
5 μL |
5 μL |
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ssRNA Reporter (FAM-BHQ1, 10 μM)c |
5 μL |
5 μL |
a. LwaCas13a Nuclease 浓度为 10 μM，即 10 pmol/μL，100 pmol 规格的总体积为 10 μL，1,000 pmol 规格的总体积为 100 μL；
b. Control Target RNAand crRNA应保存于-80℃并避免反复冻融，必须在 6 个月内使用，使用时建议取 0.5 μL 至每 20 μL 反应体系；
c. ssRNAReporter(FAM-BHQ1)应避光保存于-80℃并避免反复冻融，必须在 6 个月内使用，使用时建议取 0.5 μL 至每 20 μL 反应体系。
保存条件
Control Target RNA and crRNA 以及 ssRNA Reporter(FAM-BHQ1)于-80℃储存，其余组分-20℃储存；≤ 0℃运输。
活性定义
在总体积为 20 μL 的 1 × HOLMES Buffer 2 [pH 7.6]反应体系中，37℃反应条件下，1 min 内剪切1 pmol ssRNA 探针所需的 Cas13a 酶量定义为 1 transU。
例：若某批次 LwaCas13a 酶的反式切割活性为 9.0 transU/pmol，则表明 1 pmol 的该批次 LwaCas13a酶可在 1 min 内，在上述指定的反应条件下，反式切割 9 pmol ssRNA 探针。本公司提供的 Cas 酶 transU数值详见各批号的 COA 检测报告。
实验流程
1. 反式剪切实验
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组分 |
体积 |
终浓度 |
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10 × HOLMES Buffer 2 |
2 μL |
1 × |
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10 µM LwaCas13a Nuclease |
0.05~0.5 μL |
25~250 nM |
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10 µM crRNA |
0.05~0.5 μL |
25~250 nM |
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10 µM Target RNA |
0.05~0.5 μL |
25~250 nM |
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10 µM ssRNA Reporter (FAM-BHQ1) |
0.05~0.5 μL |
25~250 nM |
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Nuclease-free Water |
Up to 20 μL |
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*反式剪切体系中各组分的用量可以根据不同的实验目的进行调整，用量较少时可先将各组分稀释后加入体系，LwaCas13a Nuclease 可用 1×HOLMES Buf er 2 稀释，稀释后需立即使用（若要稀释后的 Cas13 酶长期保存，请使用 Cas13 Dilution Buf er，#32013），crRNA、
Target RNA 及 ssRNA Reporter 可用 Nuclease-free Water 稀释，但极低浓度的 Target RNA（例如 LOD 实验）建议用 0.1% Tween 20 稀释并使用低吸附的离心管、吸头等耗材。
*反式剪切体系中探针的用量和预期反应到达平台期的时间可参考各批号 Cas 酶 transU 的具体数值，详见本公司提供的 COA检测报告。
实时荧光定量 PCR 仪检测荧光信号，37℃反应，每 30 sec 采集一次荧光信号。
实验结果
注意事项
1. Cas13a 的顺式剪切(cis-cleavage): Cas13a 在 crRNA 的引导下，特异性地剪切 target RNA，且对 target RNA的 PFS 序列要求并不严格。
2. Cas13a 的反式剪切(trans-cleavage): 当 target RNA 存在时，Cas13a/crRNA 与 target RNA 形成三元复合物(Cas13a/crRNA/target RNA)，同时，Cas13a 被激发反式剪切活性，将反应体系中任意序列的单链 RNA切碎。
3. 为防止 RNase 污染，请保持实验区干净整洁，操作时需穿戴干净的手套、口罩，实验所用枪头、离心管等耗材均为 RNase-free。
4. Cas13a 蛋白对热敏感，容易失活，应全程冰上配置反应体系，并在使用后立即将酶置于-20℃保存。
5. 本公司提供的 Cas13a 蛋白及反应缓冲液不含任何除 Cas13a 外的任何其它核酸酶活性。
6. 本产品仅供科研使用。