产品信息

产品编号	产品名称	包装
293-77601	MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS Exosome 外泌体提取试剂盒PS	10次
299-77603		2次

产品简介

      MagCapture™ 外泌体提取试剂盒 PS 采用磷酯酰丝氨酸（PS）亲和 Tim４蛋白固化磁珠（PS亲和法）的方法可以简便快捷地提取高纯度的完整外泌体和其他细胞外囊泡（EVs）。如果想要得到更高纯度的外泌体，请使用 10,000×g 离心后的上清。该试剂盒使用含有 EDTA 的中性洗脱缓冲液将外泌体完整洗脱下来，所提取的完整外泌体和其他 EVs 可用于不同实验，包括电镜分析（TEM）、纳米粒子追踪（NTA）分析、投喂实验、分子组成（蛋白质、脂质、核酸等）分析等。

◆膜表面磷酯酰丝氨酸（PS）亲和法

 

Tim４蛋白固化磁珠，在金属离子存在的条件下亲和细胞外囊泡表面的磷酯酰丝氨酸（PS），然后使用含有 EDTA 的洗脱液进行洗脱，捕获高纯度的完整细胞外囊泡。

◆优点・特色

 
使用新型亲和提取方法

 无需进行超滤
●　使用磁珠改进了操作
●　流程优化
※　高重复性   

与其他提取方法相比
方法	外囊泡纯度	囊泡状态	可操作性	回收量
PS亲和法	■■■	完整	简便稳定	■■■
超速离心法	■■	完整	简便	■■
聚合物沉淀法	■	完整	简便快捷	■■■■
密度梯度离心法	■■■■	完整	复杂	■■
抗体亲和法	■■■	不完整	简便稳定	■■

样品类型：细胞培养上清、血清、血浆、尿液等。

●　可以纯化高纯度和完整的细胞外囊泡

●　可以从细胞上清液、血清、血浆和尿液中纯化外囊泡

●　重复性高，回收量稳定

●　简易操作（约3.5小时）

●　启用多个样品（无需超速离心）

◆试剂盒组成

产品名称	包装规格		保存条件
MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS	10次 （产品编号：293-77601）	2次 （产品编号：299-77603）	2-10°C
试剂盒成分 (1) 链霉亲和素磁珠 (2)生物素标记的外泌体捕获 (3)外泌体捕获免疫固定缓冲液 (4)外泌体结合增强剂（×500） (5)洗涤缓冲液 (6)外泌体洗脱缓冲液 (7)反应管	<10 次> 600 μL×1 管 100 μL×1 管 35 mL×1 瓶  500 μL×1 管  75 mL×2 瓶  5 mL×1 瓶  22 管	<2 次>  120 μL×1 管  20 μL×1 管  7 mL×1 瓶  100 μL×1 管  30 mL×2 瓶  1 mL×1 瓶  1 管

*每套试剂盒能完成５次回收实验，即实际使用量为 10×5次/Kit 与 2×5次/Kit

◆案例•应用

从血清、血浆、尿液中提取的细胞外囊泡的分析

从人血清中提取外泌体的产量比较

使用该试剂盒，超离法和抗体亲和法提取人血清的外泌体，接着用 CD9 和 CD63 抗体进行免疫印迹实验。

 

●　检测抗体

      抗 CD9 兔多抗，System Bioscience公司

      抗 CD63 兔多抗，System Bioscience公司

●　免疫印迹（WB）数据

      各样品结果相当于 150 μL 的血清样本。从 100 μL 提取物中取出 15 μL，添加５μL的 4×SDS 样品缓冲液，全部上样。

从人EDTA血浆中提取外泌体

分别从１mL 的 EDTA 血浆、EDTA 血浆（超滤更换缓冲液）、人血清中提取外泌体，进行 WB 检测（抗 Flotillin2 抗体）。

●　检测抗体

      抗 Flotillin-2小鼠单抗（29/Fotillin-2），BD Bioscience 公司

●　使用样品量

      各１mL

●　免疫印迹（WB）数据

      各样品结果分别对应 150 μL 样品量。从 100 μL 提取物中取出 15 μL，添加５μL的 4×SDS 样品缓冲液，全部上样。

 

从人尿液中提取外泌体的回收量比较

１mL人尿液分别通过本试剂盒、聚合物沉淀法、超离法进行外泌体回收，并做免疫印迹（WB）检测（抗 CD9 抗体）。

●　检测抗体

   抗 CD9 兔多抗，System Biosciences 公司

●　使用样品量

   各１mL

●　免疫印迹（WB）数据

   各样品结果分别对应 150 μL 尿液样品。从 100 μL 提取物中取出 15 μL，加入５μL的 4×SDS 样品缓冲液，全部上样。

 

◆与传统沉淀法的功能比较实验

 

分别用本试剂盒、超离心法和聚合物沉淀法从K562（人慢性骨髓性白血病）细胞培养上清（无血清培养上清或 10% Exosome-depleted FBS 添加培养基）提取外泌体，分别比较三种方法的外泌体回收量和外泌体纯度。

 

MagCapture™ 外泌体提取试剂盒 PS【PS 亲和法】

 

按照试剂盒的操作说明（反应时间：3小时），从1 mL经过离心处理（10,000×g，30min）的 K562 细胞培养上清（无血清培养基或 10% Exosome-depleted FBS 添加培养基※1）中提取外泌体。

 

超速离心法

将 10 mL 经过离心处理（10,000×g，30 min）的 K562 细胞培养上清（无血清培养基或 10% Exosome-depleted FBS 添加培养基※1）进行超离（110,000×g，70 min），用 TBS 缓冲液重悬沉淀物后，再进行超离（110,000×g，70 min），回收沉淀部分。

 

聚合物沉淀法

从 1 mL 经过离心处理（10,000×g，30 min）的 K562 细胞培养上清（无血清培养基或 10% Exosome-depleted FBS 添加培养基※1）中，按照市售的A公司产品的操作说明（静置时间：过夜）提取外泌体。

※1：110,000×g 离心２小时，在不吸到沉淀的前提下回收上清。

 

比较提取的外泌体的透射电子显微镜（TEM）分析结果和纳米粒子追踪（NTA）分析结果

分别用本试剂盒、超离法、聚合物沉淀法提取外泌体，用 NanoSight LM10 检测外泌体片段的粒子直径。另外，用最终浓度为２%的多聚甲醛固定提取到的外泌体片段（２~4×10¹⁰ particles），在透射电子显微镜进行分析。

电子显微镜图像 数据提供：金泽大学 医学系 华山教授、大阪大学 iFReC 中井先生

MagCapture™ 可提取到很多 100 nm 左右的粒子，在透射电子显微镜中也可以确认到很多细胞外囊泡。

K562 细胞培养上清提取的外泌体回收量和纯度的比较（无血清培养基）

用 PS 亲和法、超离法和聚合物沉淀法从 K562 细胞培养上清（无血清培养基）获得样品进行电泳。接着用银染色和 WB 法（CD63, Flotilin-2 和 Lamp-1 抗体）进行实验。