产品简介

哺乳动物发光，一般是将萤火虫荧光素酶(firefly luciferase)基因整合到需观察细胞的染色体DNA上，以表达荧光素酶，培养出能稳定表达荧光素酶的细胞株，当细胞分裂、转移、分化时，荧光素酶也会得到持续稳定的表达。标记后的荧光素酶只有在活细胞内才会产生发光现象，并且发光强度与标记细胞的数目呈线性相关。除萤火虫荧光素酶外，有时也会用到海肾荧光素酶(renilla luciferase)。二者的底物不同，萤火虫荧光素酶的底物是荧光素(D-luciferin,常见钾盐或者钠盐)。二者的发光波长也不一样，前者发光波长在540-600 nm,后者发光波长在460-540nm。荧光素所发的光更容易透过组织，在体内代谢较慢，而且特异性好。所以大部分活体成像实验采用萤火虫荧光素酶基因作为报告基因。

外观：淡黄色粉末
溶解性：water 50mg/ml;
纯度：>98%,实测大于99%
储存条件：避光-20℃储存

产品用途：D-Luciferin作为荧光素酶的底物，存在于多种发光生物体中。在ATP和荧光素酶的催化作用下，荧光素被氧化，产生蓝绿色的光(560nm)，当底物过量时，产生的光量子数与荧光素酶的浓度呈正相关。编码荧光素酶的Luc基因是植物、细菌、哺乳动物细胞的常见报告基因。由于没有背景干扰，因此可以很容易检测出低至0.02 pg水平的荧光素酶。

荧光素钾盐操作方法

一：体外生物发光试验荧光素试剂的制备
材料
—D-荧光素，钾盐D-luciferin，potassium salt 
—无菌纯水
—完全培养基（自行配置）
步骤
1. 用无菌水制备200X荧光素原液（30mg/ml），轻轻颠倒摇动至荧光素完全溶解。混匀后立即使用或分装后-20℃冻存。
2. 将D-luciferin，potassium salt 溶解于预热好的组织培养基中制备成浓度为150 μg/ml的工作液。用组织培养基1∶200稀释储存液，配置工作液(终浓度150μg/mL)。
3. 去除培养细胞的培养基。
4. 图像分析前，向细胞培养板中添加1×荧光素工作液，然后进行图像分析。
—注射器滤膜过滤除菌，0.2 μ m
*提示：成像前在37℃下对细胞进行短时间孵育可增强信号。

二：活体成像分析
材料
—D-荧光素，钾盐 D-luciferin，potassium salt 
—D-PBS,不含钙、镁（细胞培养级）
1：用无菌的DPBS（w/o Ca2+ ;Mg2+）配制D-荧光素钾盐工作液（15mg/ml），0.2µm滤膜过滤除菌。混匀后立即使用或分装于-20℃或-80℃冻存，避免反复冻融。一旦使用，放到4℃解冻，保持冰冷且避光。
2：注射量取决于注射方式，具体如下：

3： 注射入体内10-20 min（待光信号达到最强稳定平台期），再进行成像分析。
注意：建议对每只动物模型都需要建立荧光素酶动力学曲线，从而确定最高信号检测时间和信号平台期。保存和操作的过程中都要避光。另外水溶性储存液过滤除菌后，可以-20℃或-80℃分装冻存，避免反复冻融。如果有条件，对储存液充氮气或氩气（防止氧化），稳定性和保存时间更长，长达1年。 注射方式，动物类型以及体重等都会影响信号的发射，因此建议每次实验都要做荧光素酶动力学曲线，确定最佳信号平台期和最佳的检测时间。荧光素钾盐和荧光素钠盐应用上没有差别，两者的差别在于物理性状上如外形和溶解性。钠盐的水溶性高于钾盐。从目前发表的文献来看，钾盐的使用率远高于钠盐，尤其是体内实验。两者功效相同。 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。