急性呼吸道感染是儿童常见的呼吸道疾病,通常由病毒引起。呼吸道合胞病毒(RSV)和呼吸道腺病毒(ADV)是引起儿童急性呼吸道感染的两种常见病原体。轻度者可引起常见的感冒症状,如咳嗽和流鼻涕,而严重者可出现严重的并发症,如肺炎和中耳炎。根据世界卫生组织的建议,病原体的检测需要具备快速、准确、敏感、特异性的特点,不应依赖专门的技术人员或大型仪器。因此,开发一种能够满足上述检测要求的RSV和ADV的检测方法尤为重要。深圳儿童医院儿科研究所的马东礼主任课题组在《Scientific Reports》期刊上发表文章《A multiplex recombinase polymerase amplification assay combined with CRISPR/ Cas12a for the detection of respiratory syncytial virus and respiratory adenovirus》,影响因子4.6。
研究概述
将多酶恒温快速核酸扩增技术MIRA与CRISPR/Cas检测系统相结合。通过设计MIRA引物和CRISPR rna(crRNAs),多序列比较,优化反应条件,并使用荧光数值检测装置,验证灵敏度和特异性。并且以qPCR结果作为比较对照,研究了160例临床咽拭子样本的检测结果的一致性。
(MIRA-CRISPR/Cas12a检测法检测步骤示意图)
实验结果
1.MIRA-CRISPR/Cas12a检测方法灵敏度和特异性
在MIRA方法检测中,使用RSV-F1/R1引物对从RSV、ADV、PIV、RhV、MP、CP、FluB、hMPV、FluA或RSV/ADV合并感染患者的咽拭子样本中扩增核酸。除RSV和ADV有扩增条带,其他结果均为阴性,说明所选MIRA引物与检测的其他8种病原体未发生交叉反应,且保守性良好。随后,使用无菌水对RSV和ADV重组质粒进行10倍梯度稀释,对RSV和ADV的检测限均为106copies/mL。
(1-10:分别为RSV、RSV/ADV合并感染患者咽拭子样本以及其他呼吸道病原体样本)
(1-6:107至102稀释质粒DNA;7:阴性对照)
2.与qPCR做对比
与qPCR方法相比,RSV和ADV的检出限均为103copies/mL。
(qPCR检测RSV和ADV的灵敏度)
MIRA-CRISPR方法更适合基层实验室,检测时间短,操作简单,无需大型qPCR仪器即可完成实验操作。
3.临床样本对比
从急性呼吸道感染的儿童中采集咽拭子样本160例。同时使用MIRA-CRISPR方法、qPCR方法进行检测,并将结果与临床试验结果进行比较。与qPCR方法相比,MIRA-CRISPR方法对RSV和ADV的敏感性分别为98.1%和91.4%,检测特异性均为100%。Kappa值大于0.95,表明其一致性程度较高。
MIRA-CRISPR方法对RSV和ADV的检测具备快速、灵敏、特异性强的优势。它能及时准确地检测到病毒感染,更加适合于医疗资源匮乏的地区使用。
·
安普未来生物介绍
·
·
安普未来多酶恒温快速核酸扩增技术MIRA技术在恒温39°C-42°C下核酸扩增,反应时间仅为5-20 min。此外,不需要严格的实验室条件,应用场景多元化:综合医院检验科、基层医疗、居家检测、田间地头等。
试剂产品形态多样化:冻干粉、冻干微球等;显示结果的多样性:凝胶电泳、荧光曲线、胶体金试纸条等。试剂性能稳定、便于操作、方便存储运输。
并且安普未来生物以MIRA为核心平台技术研发出“超快速核酸释放技术”、“双通道恒温荧光检测仪”、“自测型核酸检测装置”等一系列配套产品,打造快速分子检测整体解决方案。
RPA试剂盒及试纸条系列:
货号 |
产品 |
规格 |
JY0209 |
双靶标HybriDetect侧向层析试纸条(彩虹型) |
50T |
JY0201 |
单靶标HybriDetect侧向层析试纸条(彩虹型) |
50T |
JY0307 |
Tiosbio® CRISPR单酶切及扩增产物检测试纸条 |
50T |
JY0301 |
CRISPR Cas12/13 HybriDetect试纸条 |
50T |
JY0308 |
Tiosbio® CRISPR双酶切检测试纸条(变色龙) |
50T |
WLB8201KIT |
DNA恒温快速扩增试剂盒(基础型) |
48T |
WLE8202KIT |
DNA恒温快速扩增试剂盒(荧光型) |
48T |
WLN8203KIT |
DNA恒温快速扩增试剂盒(胶体金试纸条型) |
48T |
WLRB8204KIT |
RNA恒温快速扩增试剂盒(基础型) |
48T |
WLRE8205KIT |
RNA恒温快速扩增试剂盒(荧光型) |
48T |
WLRN8206KIT |
RNA恒温快速扩增试剂盒(胶体金试纸条型) |
48T |
WLB5001 |
DNA恒温快速扩增试剂盒(液体基础型) |
100T |
WLN5002 |
DNA恒温快速扩增试剂盒(液体胶体金型) |
100T |
WLR5003 |
DNA恒温快速扩增试剂盒(液体荧光型) |
100T |
WLRB5001 |
RNA恒温快速扩增试剂盒(液体基础型) |
100T |
WLRN5002 |
RNA恒温快速扩增试剂盒(液体胶体金型) |
100T |
WLRE5003 |
RNA恒温快速扩增试剂盒(液体荧光型) |
100T
|
Cas酶系列
货号 |
包装规格 |
中文名称 |
32108-01 |
100 pmoL |
LbCas12a (Cpf1) |
32108-03 |
1,000 pmoL |
LbCas12a (Cpf1) |
32117-01 |
100 pmoL |
LwaCas13a (C2c2) |
32117-03 |
1,000 pmoL |
LwaCas13a (C2c2) |
32118-01 |
100 pmoL |
AapCas12b (C2c1) |
32118-03 |
1,000 pmoL |
AapCas12b (C2c1) |
32119-01 |
100 pmoL |
Un1Cas12f1 (Cas14a1) |
32119-03 |
1,000 pmoL |
Un1Cas12f1 (Cas14a1) |
32104-01 |
100 pmoL |
AsCas12a (Cpf1) |
32104-03 |
1,000 pmoL |
AsCas12a (Cpf1) |
32116-01 |
100 pmoL |
AacCas12b (C2c1) |
32116-03 |
1,000 pmoL |
AacCas12b (C2c1) |
32106-01 |
100 pmoL |
FnCas12a (Cpf1) |
32106-03 |
1,000 pmoL |
FnCas12a (Cpf1) |
32110-01 |
100 pmoL |
Lb5Cas12a (Cpf1) |
32110-03 |
1,000 pmoL |
Lb5Cas12a (Cpf1) |
32101-01 |
100 pmoL |
SpCas9 |
32101-03 |
1,000 pmoL |
SpCas9 |
32102-01 |
100 pmoL |
Sp-dCas9 |
32102-03 |
1,000 pmoL |
Sp-dCas9 |
32120-01 |
100 pmoL |
Sp-nCas9(H840A) |
32120-03 |
1,000 pmoL |
Sp-nCas9(H840A) |
- 上一页:Biozellen 3D细胞培养基质胶
- 下一页:福利 | mRNA产品 订购送好礼