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细胞分选常见疑问

细胞分选常见疑问??

问题一

为什么建议磁珠分选而不是流式分选?

1)磁珠分选需要的设备简单,而流式分选需要配备分选型流式细胞仪,价格较为昂贵,而且流式分选对于操作员的技术要求很高,需要专门的培训并有一定的经验后才能很好地完成流式分选;

2)磁珠分选所需要的时间远小于流式分选所需要的时间;

3)磁珠分选对于目的细胞的刺激比流式分选要小,流式分选过程中需要对目的细胞所在的液滴通电,并且需要经过一个强电场的区域,对目的细胞的刺激相对较大;磁珠分选只是让细胞处于一个低磁场中,基本可以忽略对细胞的影响,从保持细胞活力的方面考虑,磁珠分选要优于流式分选。

因此,如果磁珠分选可以满足实验需求时,应尽量选择磁珠分选的方法。

问题二

磁珠分选为什么要求细胞活性越高越好?

1)死细胞分泌DNA,DNA有粘性,会将磁珠标记细胞和非标记细胞粘在一起,如果是阳选会影响纯度,如果是阴选会影响得率。

2)细胞活性低时可能会影响抗原抗体的结合效率。

 

问题三

磁珠分选buffer是什么?

autoMACS running buffer(自己配制:pH7.2 PBS,0.5%BSA、2mM EDTA,如需无菌,建议购买商品化buffer或紫外线照射,不建议高温高压灭菌)。

 

问题四

如果想分选的细胞有多个阳性marker怎么办?

可以选择磁珠分选阴选+阳选的方法,eg.分选小鼠脾脏naive CD4+T可以先用阴选的方法分到CD4+T细胞再用CD62L磁珠阳性分选;也可以用磁珠+流式的方法。

 

问题五

分选柱可以二次使用吗?

不建议,主要是分选柱内填充的铁珠在使用后易生锈。

 

问题六

 分选柱应如何选择?

 

不同的试剂盒对于MS/LS/LD柱的最大细胞上样量和最大磁性细胞吸附量是不同的,建议一定要参考说明书;

此外,如分选的目的细胞较大(eg.巨核细胞或fibroblast),可考虑采用large cell colums。