PA-Taq新型亲和标签系统（日本wako）是利用单克隆抗体（NZ-1）识别肽标签（GVAMPGAEDDVV）的高亲和性&高特异性的亲和纯化标签系统。PA tag 系统的亲和性特异性优于现有标签系统，抗体微珠可再生40-60次，可用于免疫细胞化学、免疫印迹和流式细胞术，是动物宿主细胞重组蛋白生产中的有效工具。
◆特点
● 通过树脂再生，降低运行成本
● 超高亲和性抗体，实现高回收率、高纯度纯化
● 在动物细胞表达系（HEK293T细胞、CHO细胞等）中，有效纯化蛋白
● PA标签系统是使用可识别肽标签（12个氨基酸残基）的单抗（NZ-1）。日本开发的亲和性纯化标签系统。
● NZ-1单抗对PA tag具有高亲和性和特异性，可应用于Western Blotting、细胞流式分析、免疫组化（ICC）。
通过免疫沉淀，可纯化PA标签融合蛋白以及树脂再生。
● PA标签系统，可一步纯化高纯度PA标签融合蛋白。
◆PA标签系统
Fujii, Y. et al., "PA tag: A versatile protein tagging system using a super high affi nity antibody against a dodecapeptide derived from human podoplanin.", Protein Exp. Purif., 95, 240-247(2014).
Fujii,
Y. et al.
新型亲和标签系统“PA tag”的应用方法~蛋白的纯化及检测~ 蛋白科学学会档案, 7, e075 (2014)
◆PA标签表达载体案例
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载体 |
表达模式 |
宿主细胞 |
MCS启动子 |
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pCAG |
瞬时表达 |
灵长类（人、猴）、犬细胞等粘着细胞 |
CAG |
◆用PA标签从培养上清中亲和提纯的案例
数据提供：大阪大学 蛋白研究所附属蛋白分析先进研究中心
分子创制学研究室 高木淳一老师，藤井勇树老师
◆Protocol目的蛋白的纯化
１．哺乳类动物细胞转染(HEK293T)
转染处于40-60%融合状态的细胞
培养基：D-MEM, 5%FBS
２．回收培养上清和吸附蛋白树脂
转染48-72小时后，回收约420 mL培养上清，加入8 mL抗PA标签抗体琼脂糖珠，混合2小时（2-10℃）
３．树脂回收
用50
mL的纯化柱。回收步骤2)中的琼脂糖珠
４．树脂洗涤
加入珠4倍量的TBS 缓冲液（20 mM
Tris-HCl, 150 mM NaCl），清洗5次
５．PA标签肽从树脂中竞争性洗脱
加入经1×TBS溶液, pH 7.5溶解过的PA 标签肽（终浓度0.1 mg/mL），体积量需为珠的一倍，
然后分10次回收PA标签融合蛋白X
６．SDS-PAGE
样品量
c.
sup：5 μL, flow through：5 μL, wash：5 μL,
肽洗脱（1-10）：各10 μL
可纯化PA标签融合蛋白X且不依赖PA标签。→可实现极高纯度的亲和纯化。
◆通过PA tag降低背景的方法
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M: Marker |
在20 mL的昆虫细胞溶解液中加入蛋白Z，使其浓度变为1.0 mg/L后，添加200 μL抗PA标签抗体琼脂糖珠，4℃温度条件下，搅拌3小时。
分别用不同浓度的TBS溶液（0.15 M、0.5 M、1.0 M NaCl）进行调整，用琼脂糖珠50倍量清洗。在回收的各珠中加入0.5 mL 0.1 M Glycine-HCl(pH 2.7)，室温条件下平稳震动5 min。
离心后回收上清，用1 M Tris-HCl (pH 9.0)做中和处理。
SDS-PAGE后进行银染，比较去除污染蛋白之后，不同浓度下的结果。
◆使用案例：Western Blotting
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地域革新领域 加藤 幸成老师，金子 美华老师 NZ-1显示出与天然抗体具有相同的高检测灵敏度。 |
Lane 1 一抗：抗IDH1抗体（RcMab-1）, 1 μg/mL
二抗：抗大鼠IgG-HRP标签, 1000倍稀释 一抗：抗PA tag抗体, 1 μg/mL
二抗：抗大鼠IgG-HRP标签, 1000倍稀释 一抗：抗DYKDDDDK标签抗体, 3.5 μg/mL
二次抗体：抗小鼠IgG-HRP标签, 1000倍稀释 |
◆PA标签系列
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产品名称 |
子类克隆号 |
适用实验 |
规格 |
产品编号 |
包装 |
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单抗 |
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抗PA标签, 大鼠单抗 Anti PA tag, Rat Monoclonal Antibody |
大鼠IgG2a |
IP, WB, FCM, ICC |
免疫化学用 |
200 μL |
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1 mL |
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HRP标签单抗 |
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抗PA标签, 大鼠单抗,过氧化酶结合 Anti PA tag, Rat Monoclonal Antibody, Peroxidase Conjugated |
大鼠IgG2a NZ-1 |
WB |
免疫化学用 |
200 μL |
|
|
1 mL |
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产品名称 |
子类克隆号 |
规格 |
产品编号 |
包装 |
|
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抗体结合琼脂糖珠 |
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抗PA标签抗体琼脂糖珠 Anti PA tag Antibody Beads |
大鼠IgG2a NZ-1 |
免疫化学用 |
2 mL(Net 1 mL) |
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|
10 mL (Net 5 mL) |
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50 mL (Net 25 mL) |
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识别N端、C端的PA标签 |
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抗体结合磁珠 |
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MagCaptureTM HP 抗PA标签抗体磁珠 MagCapture™ HP Anti PA tag Antibody Magnetic Beads |
大鼠IgG2a NZ-1 |
免疫化学用 |
2 mL |
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溶液组成：1×TBS(pH 7.4), 50% glycerol, 0.05 w/v% sodium azide |
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产品名称 |
备注 |
规格 |
产品编号 |
包装 |
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肽 |
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PA标签肽 PA tag Peptide |
含量（HPLC）95%以上 |
基因研究用 |
5 mg |
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25 mg |
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清洗溶液 |
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PA标签清洗溶液 PA tag Washing Solution |
已过滤消毒 |
基因研究用 |
50 mL |
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产品名称 |
可选Marker |
产品编号 |
包装 |
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大肠杆菌 |
动物细胞 |
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瞬时载体 |
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pCAG-Ble PA 标签-C pCAG-Ble PA tag-C |
Bleomycin |
20 μg |
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pCAG-Ble PA 标签-N 信号 增加型 pCAG-Ble PA tag-N Signal Plus |
Bleomycin |
20 μg |
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pCAG-Bsd PA 标签-C pCAG-Bsd PA tag-C |
Blasticidin S |
20 μg |
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|
pCAG-Bsd PA 标签-N 信号 增加型 pCAG-Bsd PA tag-N Signal Plus |
Blasticidin S |
20 μg |
||
|
pCAG-Neo PA 标签-C pCAG-Hyg PA tag-C |
Hygromycin B |
20 μg |
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pCAG-Hyg PA 标签-N 信号 增加型 pCAG-Hyg PA tag-N Signal Plus |
Hygromycin B |
20 μg |
||
|
pCAG-Neo PA 标签-C pCAG-Neo PA tag-C |
Kanamycin |
G418 |
20 μg |
|
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pCAG-Neo PA 标签-N 信号 增加型 pCAG-Neo PA tag-N Signal Plus |
Kanamycin |
G418 |
20 μg |
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◆相关产品
内参照
下表为Western Blot实验中参照用单抗一览表。
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产品名称 |
规格 |
产品编号 |
包装 |
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抗β肌动蛋白单抗 |
免疫化学用 |
200 μg |
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|
1 mg |
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|
5 mg |
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抗β肌动蛋白单抗,过氧化物酶标记 Anti β-Actin, Monoclonal Antibody, Peroxidase Conjugated |
免疫化学用 |
200 μL |
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|
抗α-微管蛋白, 单抗 Anti α-Tubulin, Monoclonal Antibody |
免疫化学用 |
10 μg |
|
|
200 μg |
|||
|
1 mg |
|||
|
Anti β-Tubulin,
Monoclonal Antibody |
免疫化学用 |
10 μg |
|
|
200 μg |
|||
|
1 mg |
|||
|
Anti GAPDH, Monoclonal Antibody |
免疫化学用 |
200 μg |
|
|
1 mg |
|||
|
5 mg |
|||
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Anti GAPDH, Monoclonal Antibody,
Peroxidase Conjugated |
免疫化学用 |
200 μL |
蛋白酶抑制剂系列
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产品名称 |
规格 |
产品编号 |
包装 |
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蛋白酶抑制剂混合物试剂盒 I，无动物源成分（通用型） Protease Inhibitor Cocktail Set I, Animal-derived-free (for general use) (×100), Lyophilized |
通用型 |
1 mL用 |
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1 mL用×5 |
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蛋白酶抑制剂混合物试剂盒III, DMSO溶液（不含EDTA）（×100） |
动物细胞 |
1 mL |
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|
1 mL×5 |
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蛋白酶抑制剂混合物试剂盒V （无EDTA）（×100） |
2D电泳 |
1 mL |
|
|
1 mL×5 |
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蛋白酶抑制剂混合物试剂盒 VI，DMSO溶液，用于植物（×100） |
植物细胞 |
1 mL |
|
|
1 mL×5 |
|||
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蛋白酶抑制剂混合物试剂盒VII，DMSO溶液，组氨酸标签蛋白（×100） |
His Tag 纯化※ |
1 mL |
|
|
1 mL×5 |
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