细胞DNA常用标记染料

细胞的DNA可以被多种染料标记

例如：
碘化丙啶（PI）（货号：P9206）
溴化乙锭
Hoechst 染料，主要是 Hoechst 33342（货号：S6223） 和 Hoechst 33258（货号：S6201）
Mithramycin A (Plicamycin) 光辉霉素A（货号：CB798）
DAPI（4,6-二脒基-2-苯基吲哚）（货号：P4210）
7-氨基放线菌素D（7-AAD）（货号：S8221）
TO-PRO-3染色剂
色霉素（Chromomycin）（货号 ：S8225）
        最常用的 DNA 染料是碘化丙啶 (PI)，可嵌入 DNA 双螺旋中并发出强烈的红色荧光（最大发射波长 637nm）。它的优点是可被 488nm 光激发，可用于最常见的台式流式细胞仪。然而，PI染色需要固定或透化细胞，因此细胞无法存活。PI 也会和双链 RNA 结合，所以染色时需用RNA酶去除。
如果需要保证细胞是活的，或者需要同时做表面标记或胞内标记（虽然PI也能用多聚甲醛固定和皂素破膜做，但难度较高），可选择 Hoechst 33342，它与 DNA 中富含 AT 的区域结合，无需固定即可进入活细胞，因此细胞可以在染色之后继续培养或进行后续操作。这种方法的缺点是 Hoechst 33342 通过紫外光激发，因此不能用于大多数台式流式细胞仪。
PI染色检测细胞周期的染色步骤
I.材料
1、70% 乙醇，保存在– 20度
2、DNA 染色液（10ml，新鲜配制）的组成:
①Triton–X 100 10uL
②1mg/ml碘化丙碇 200uL
③DNase-free RNase 2mg
④PBS 9.79ml
注：1mg/ml的PI储存液是由1 mg PI溶于1 ml蒸馏水中配制而成，可在0℃到4℃保存数月。
如果RNase不是DNase-free，可将2 mg RNase A在1 ml蒸馏水中煮沸5分钟。
II.步骤
取1x106 细胞/管，PBS洗涤两次，每次250g离心5分钟。
尽可能完全去除上清，加入1ml于－20℃ 预冷的70%乙醇，注意，要边振荡边加。
标本保存于-20℃，直至要进行DNA染色（可保存数周至数月）
染色当天取出标本，于250 x g 离心5分钟，尽可能完全去除上清，然后再用PBS洗涤1－2次，离心速度250g×5分钟。
加入1 ml DNA染色液，充分振荡，染色15分钟即可上机检测。
以上是比较快速的步骤您也可以先用RNAse作用30分钟（常温或37度均可，但需注意有些细胞可能不适合，需对比测试），然后再用染色液孵育15分钟。
这几种作用方式结果无差别：
Hoechst 33342检测细胞周期的染色步骤
在 37°C 下用 Hoechst 33342孵育细胞 10-60 分钟。使用的 Hoechst 浓度必须预先优化，因为不同细胞的最佳浓度会有所不同，一般在 5-20µg/ml 的范围内。
孵育完毕，以 1000 转/分的速度离心5分钟。在 PBS 中洗涤2次。必要时，可加入低浓度的PI孵育1分钟排除死细胞。
上机，收集 390nm 和 480nm 波长之间的 Hoechst 荧光。
分析
无论是PI染色还是Hoechst 33342染色，均需事先进行粘连体排除，详见：
PI检测细胞周期时如何排除粘连体
参考资料：http://www.cyto.purdue.edu/cdroms/cyto3/8/data/icrf/cycle.htm